小鼠卵巢Ski表達(dá)水平與卵泡發(fā)育的相關(guān)性研究.pdf

1、Sloan-Kettering virus gene product(Ski)是細(xì)胞核內(nèi)的原癌蛋白，屬于Ski/SnoN原癌基因超家族。Ski在各種細(xì)胞類型中發(fā)揮著不同的作用。Ski在細(xì)胞中的高表達(dá)可以誘導(dǎo)原癌細(xì)胞癌變和肌肉細(xì)胞終末分化。Ski/SnoN是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)信號(hào)通路中的重要調(diào)節(jié)因子，它們以同源或異源二聚體的形式發(fā)揮作用，其中異源二聚體的活性比較高。TGF

2、-β超家族在卵泡發(fā)育中有很重要的作用，有研究發(fā)現(xiàn)，SnoN在KM白小鼠卵巢閉鎖卵泡及黃體化過程中表達(dá)，Ski在大鼠卵巢閉鎖卵泡的顆粒細(xì)胞中表達(dá)，而其在小鼠卵巢中的功能卻還不為人知。因此，本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究Ski在不同發(fā)育時(shí)期卵泡中的表達(dá)情況，并以此來推斷其與小鼠卵泡發(fā)育的關(guān)系及在卵泡發(fā)育及黃體化過程中的生物學(xué)功能。我們以新生雌性KM小白鼠，處于各發(fā)情周期的雌小鼠及促性腺激素處理的未成熟小鼠卵巢中的卵泡為研究對(duì)象，以實(shí)時(shí)定量PCR和免疫

3、組化作為技術(shù)手段，檢測(cè)Ski在卵泡發(fā)育及黃體化過程中的表達(dá)情況，進(jìn)而推斷Ski在卵巢中的功能。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在卵泡發(fā)育的早期階段(如原始卵泡裝配、原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化過程中)，Ski在卵母細(xì)胞中呈現(xiàn)陽性表達(dá)，其中Ski在卵母細(xì)胞核中高度表達(dá)。尤其是出生后第一天(postnatal days1，PD1)小鼠卵巢的卵母細(xì)胞核中，Ski表達(dá)最高。隨著卵泡的發(fā)育，顆粒細(xì)胞增生并逐漸分化為多層，卵母細(xì)胞體積逐漸變大，膜細(xì)胞也逐漸從間

4、質(zhì)細(xì)胞中分化出來，卵巢中開始出現(xiàn)小、中型有腔卵泡，而此時(shí)Ski的表達(dá)位置逐漸從卵母細(xì)胞核向卵母細(xì)胞核及其核周轉(zhuǎn)移，總表達(dá)量逐漸降低。發(fā)情周期中，總體上，Ski在發(fā)情間期表達(dá)最強(qiáng)，發(fā)情前期和發(fā)情期表達(dá)也很明顯，發(fā)情后期表達(dá)相對(duì)最弱。激素處理的未成熟卵泡中，隨著PMSG、hCG的處理，Ski表達(dá)量逐漸減少，其中卵母細(xì)胞核周表達(dá)很明顯，卵母細(xì)胞核中很弱。但是在黃體化形成過程中，檢測(cè)到 Ski表達(dá)。實(shí)時(shí)定量 PCR結(jié)果顯示，在卵丘擴(kuò)張過程中，S

5、ki mRNA的表達(dá)方式與排卵相關(guān)基因的表達(dá)方式相反。隨著激素的刺激，卵泡的發(fā)育，排卵相關(guān)基因的表達(dá)量逐漸升高，尤其在hCG處理4小時(shí)后，表達(dá)量最高。排卵之后，表達(dá)量降低。而Ski mRNA的表達(dá)量是隨著排卵的到來逐漸降低，黃體中也檢測(cè)到Ski mRNA表達(dá)。整個(gè)發(fā)育過程中，膜細(xì)胞、顆粒細(xì)胞內(nèi)均沒發(fā)現(xiàn)Ski的表達(dá)。Ski在卵泡發(fā)育，排卵及黃體形成過程中有特殊的表達(dá)方式。所以我們推測(cè)，Ski在KM小白鼠卵泡發(fā)育過程中有重要的作用，尤其對(duì)早