丹參對凍融小鼠卵巢組織移植早期促進卵泡發(fā)育和血管生成作用的研究.pdf

1、目的：
　　 探討丹參對凍融小鼠卵巢組織移植早期促進卵泡發(fā)育和血管生成作用的研究。
　　 方法：
　　 實驗一:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠雜交后的F1代第一天(d1)小鼠卵巢慢凍速融后移植至8～12周齡的雄鼠腎臟被膜下,移植后小鼠按給藥不同分為生理鹽水組和低(0.4ml/kg)、中(4ml/kg)、高(40ml/kg)劑量丹參干預(yù)組,分別于移植后第二天(2d)、第七天(7d)和第十四天(14d)回

2、收卵巢移植物。光鏡和電鏡技術(shù)觀察卵巢組織凍融前后和移植前后的組織形態(tài)學(xué)改變、計數(shù)卵泡數(shù)量、免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測細胞凋亡、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial GrowthFactor,VEGF)的表達和計數(shù)微血管密度。
　　 實驗二:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠雜交的F1代4周齡小鼠卵巢,慢凍速融后移植至F1代8～12周齡的雄鼠腎臟被膜下,移植后小鼠按給藥不同分為丹參組(4ml/kg)和生理鹽

3、水組,分別于移植后1d(24h),2d(48h)和7d回收卵巢移植物,將凍融以及移植后不同時間段的卵巢組織HE染色后行卵泡計數(shù)、免疫組織化學(xué)分析及RT-PCR法檢測血管相關(guān)基因VEGF的表達。
　　 結(jié)果：
　　 實驗一:
　　 1、小鼠卵巢經(jīng)凍融后原始卵泡的存活率為88.8％。
　　 2、光、電鏡觀察卵巢組織移植后7d卵泡細胞和顆粒細胞結(jié)構(gòu)欠完整,移植后14d卵泡結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。
　　 3、移植后

4、14d丹參組各級卵泡數(shù)及卵泡存活率多于生理鹽水組(12.7％),尤以高、中劑量丹參組(31.2％、24.2％)差異顯著(P<0.05)；移植后VEGF蛋白表達呈上升趨勢,至14d仍維持較高水平,尤以高、中劑量丹參組差異顯著(P<0.05)；移植卵巢組織后各時間段細胞凋亡指數(shù)逐漸下降,移植后14d高、中劑量丹參組細胞凋亡指數(shù)最低(2.53±0.03％、3.25±0.02％)。
　　 實驗二:
　　 1、移植卵巢組織各時間段

5、丹參組的卵巢卵泡計數(shù)及卵泡存活率均高于生理鹽水對照組,P<0.05。
　　 2、移植小鼠卵巢組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達有上升趨勢,第7d達最高峰,兩組之間無顯著性差異,P>0.05。
　　 3、移植卵巢組織各時間段丹參組的細胞凋亡指數(shù)均低于生理鹽水對照組,P<0.05。
　　 4、移植后48h VEGF164 mRNA和VEGF188 mRNA的表達量增加,且丹參組高于對照組,兩組之間有顯著性差異

6、,P<0.05；而兩組之間VEGF120 mRNA的表達無明顯變化,P>0.05。
　　 結(jié)論：
　　 1、結(jié)合光鏡和電鏡觀察能更全面地評價凍融過程和移植過程對小鼠卵巢組織的影響。常規(guī)慢凍.速融方法能較好保存小鼠卵巢組織原始卵泡的形態(tài)結(jié)構(gòu)。移植早期的缺血缺氧對小鼠卵巢組織造成了遠比凍融過程更嚴重的損傷,其主要發(fā)生在移植后一周內(nèi)。
　　 2、凍融小鼠卵巢組織移植后原始卵泡能存活并生長發(fā)育成竇卵泡。
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