血管生成素-1對(duì)油酸致小鼠肺損傷早期的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察血管生成素-1（angiopoietin-1，Ang-1）對(duì)油酸導(dǎo)致的小鼠肺損傷（acute lunginiury，ALI）早期的保護(hù)性作用及其對(duì)緊密連接相關(guān)ZO-1（zonula occludens-1）蛋白和VE-鈣粘蛋白（VE-cadherin）的調(diào)節(jié)作用，并初步探討其機(jī)制。
　　 方法:將140只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為7組，每組20只。肺損傷組（A組）：從小鼠尾靜脈注射油酸（0.2 ml/kg）制備肺損傷

2、動(dòng)物模型，4小時(shí)后腹腔注射等量生理鹽水；肺損傷+Ang-1組（B組）：建立肺損傷模型后4小時(shí)，腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg）；肺損傷+Ang-1+LY294002組（C組）：建立肺損傷模型后4小時(shí)，腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg），同時(shí)經(jīng)腹腔注射PI3K/Akt特異性抑制劑LY294002干預(yù)（100 mg/kg）；肺損傷+LY294002組（D組）：建立肺損傷模型后4小時(shí)，腹腔注射等量生理鹽水，同時(shí)注射L

3、Y294002（100 mg/kg）；正常對(duì)照組（E組）：經(jīng)過(guò)尾靜脈注射等量生理鹽水，4小時(shí)后再經(jīng)腹腔注射等量生理鹽水；正常對(duì)照+LY294002組（F組）：經(jīng)過(guò)尾靜脈注射等量生理鹽水，4小時(shí)后經(jīng)腹腔注射LY294002（100 mg/Kg）；正常對(duì)照+Ang-1組（G組）：經(jīng)過(guò)尾靜脈注射等量生理鹽水，4小時(shí)后經(jīng)腹腔注射血管生成素-1（312.5μg/kg）。8小時(shí)后每組隨機(jī)抽取半數(shù)小鼠斷頸法處死，后進(jìn)行肺泡灌洗；另一半處死后，右肺進(jìn)行

4、濕/干重檢測(cè)，左肺留取標(biāo)本檢測(cè)。分別測(cè)定肺濕/干重比、肺泡灌洗液總細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量變化；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）法、蛋白印跡法（western blot）及免疫組化法測(cè)定肺組織中ZO-1、VE-cadherin的表達(dá)；光鏡觀察并盲法評(píng)分比較肺組織病理學(xué)改變。
　　 結(jié)果:B組肺濕/干重比、肺泡灌沈液總細(xì)胞計(jì)數(shù)

5、、中性細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量及肺損傷評(píng)分分別為（4.02±0.24）、（33.84±2.56）×104/L、（19.78±1.64）×103/L、（162.84±17.26）μg/ml、（1.73±0.14），與A組[（5.29±0.20）、（42.84±3.67）×104/L、（26.11±2.49）×103/L、（227.98±13.06）μg/ml、（3.42±0.11）]及C組[（5.09±0.19）、（40.18±1.79）×10

6、4/L、（23.80±1.38）×103/L、（211.96±19.10）μg/ml、（3.20±O.22）]比較均有下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），而B(niǎo)組ZO-1、VE-cadherin的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平均高于A組及C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；C組肺濕/干重比、肺泡灌洗液中性細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量及肺損傷評(píng)分低于A組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），但是灌洗液總細(xì)胞計(jì)數(shù)、ZO-1、VE-cadheri

7、n的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平A組、C組之間不存在顯著差異（p＞0.05）；B組肺濕/干重比、肺泡灌洗液總細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量及肺損傷評(píng)分顯著高于E組，兩種蛋白mRNA水平及蛋白表達(dá)水平低于E組（P<0.05）：A組與D組之間以及E組、F組、G組三組之間比較各指標(biāo)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 結(jié)論:血管生成素-1減輕了油酸誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠早期的肺部滲出和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，阻止了肺損傷早期緊密連接相關(guān)Z