TNFα對(duì)小鼠卵泡發(fā)育的影響.pdf

1、卵巢是雌性生殖器官的一部分，動(dòng)物卵巢發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，包括從早期胚胎發(fā)育一直到卵巢衰老。而且卵巢是一個(gè)在整個(gè)生命周期中不斷進(jìn)行連續(xù)修復(fù)的動(dòng)態(tài)系統(tǒng)，細(xì)胞凋亡是維持這個(gè)動(dòng)態(tài)修復(fù)系統(tǒng)的重要機(jī)制。卵泡是卵巢的結(jié)構(gòu)功能單位，卵泡的發(fā)育依次經(jīng)歷了原始卵泡(primordial follicle)、初級(jí)卵泡(primary follicle)、次級(jí)卵泡(secondary follicle)和成熟卵泡(mature follicle)四個(gè)階段。卵

2、巢卵泡的發(fā)育是一個(gè)由內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌因子所調(diào)控的一系列復(fù)雜的過(guò)程。
　　腫瘤壞死因子α(TNFα)是卵巢卵泡發(fā)育中的一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子。它是由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的17.3 kDa的蛋白。TNFα的作用十分復(fù)雜，既能提升細(xì)胞存活，又能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。TNFα的多樣的作用是通過(guò)細(xì)胞表面的專門的受體所介導(dǎo)的，包括TNFRⅠ和TNFRⅡ。許多報(bào)道指出，TNFα的大多數(shù)生物學(xué)作用是通過(guò)TNFRⅠ來(lái)介導(dǎo)的。TNFα具有廣泛的生物學(xué)活性，具

3、有強(qiáng)大的抗腫瘤作用，是迄今發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子，此外，TNFα也參與了一些疾病如心血管病和自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展。在哺乳動(dòng)物卵巢中，已有體外實(shí)驗(yàn)表明，TNFα在卵泡發(fā)育、排卵、甾類生成、黃體化、生殖和閉鎖等方面發(fā)揮著重要的作用，但是目前利用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來(lái)研究TNFα在卵巢內(nèi)的作用的報(bào)道還很少。
　　本實(shí)驗(yàn)是首次利用TNFα敲除的小鼠模型來(lái)進(jìn)一步研究其在卵泡發(fā)育和繁殖力方面的作用。并在分子水平和細(xì)胞水平上對(duì)敲除 TNFα后

4、卵泡發(fā)育和繁殖力的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)將為在正常卵巢中進(jìn)一步研究TNFα作用的分子機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　1. TNFα-/-小鼠的陰道開口時(shí)間與WT小鼠的陰道開口時(shí)間相似。小鼠2個(gè)月齡時(shí)，TNFα-/-與WT小鼠的發(fā)情周期長(zhǎng)度基本沒有明顯變化，但是TNFα-/-的小鼠與野生型的小鼠相比，處于發(fā)情期的時(shí)間要明顯延長(zhǎng)，而處于間情期的時(shí)間要短。所以，TNFα-/-的小鼠在21天中發(fā)情周期的個(gè)數(shù)要比野生型的

5、小鼠多。但當(dāng)小鼠6個(gè)月大時(shí)，TNFα-/-的小鼠僅有50％的表現(xiàn)出發(fā)情周期，而在這些有發(fā)情周期的小鼠中，大部分時(shí)間也都處于間情期，很少時(shí)間處于發(fā)情期。所以，在衰老期的小鼠中，TNFα-/-的小鼠在21天中發(fā)情周期的個(gè)數(shù)要比野生型的小鼠要少。
　　2.21天時(shí)，TNFα-/-的小鼠超排所得的卵明顯比野生型的小鼠排的卵多。而且，在隨后的孕酮檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，TNFα-/-的小鼠的孕酮含量明顯要比野生型的小鼠中的多。
　　3.對(duì)出生后4

6、，18，42，90天的兩種類型的小鼠進(jìn)行的卵泡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明，總體上來(lái)說(shuō)，TNFα-/-的小鼠中的卵泡總數(shù)、各級(jí)卵泡數(shù)特別是腔前和有腔卵泡數(shù)都要比處于同一時(shí)期的野生型的小鼠中的多。
　　4.對(duì)兩種類型的小鼠卵巢卵泡進(jìn)行的增殖與凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明，在蛋白水平上來(lái)看，在小鼠90天時(shí)，TNFα-/-的小鼠卵巢的顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中CDK4蛋白的水平要比野生型小鼠中的高很多。而 TNFα-/-的小鼠卵巢卵母細(xì)胞中CASPASE3蛋白的

7、水平明顯要比野生型小鼠的卵巢卵母細(xì)胞中的低很多。在分子水平上來(lái)看，在小鼠90天時(shí)，TNFα-/-小鼠卵巢內(nèi) Cdk4和Cyclin D2的表達(dá)水平明顯要高于野生型的小鼠卵巢內(nèi)的相應(yīng)基因表達(dá)量。而 TNFα-/-小鼠卵巢內(nèi)促凋亡因子 Bad和Bax的表達(dá)水平明顯要低于野生型的小鼠卵巢內(nèi)的基因表達(dá)量。
　　5. TNFα-/-小鼠和WT小鼠的繁殖力比較是通過(guò)檢測(cè)小鼠每窩的產(chǎn)仔數(shù)和12個(gè)月連續(xù)的產(chǎn)仔累積量來(lái)實(shí)現(xiàn)的。TNFα-/-的小鼠平