lmp2對大鼠卵泡發(fā)育影響的研究.pdf

1、目的：卵巢的卵泡發(fā)育是一個較為復(fù)雜的過程。它主要包括卵母細(xì)胞生長、顆粒細(xì)胞增殖、分化、閉鎖、凋亡等重要事件。在這一過程中，多種蛋白水解酶參與了這些重要事件的調(diào)控。lmp2是蛋白水解酶復(fù)合體中的一個重要的功能性亞單位，它對蛋白水解酶復(fù)合體發(fā)揮水解酶活性至關(guān)重要。lmp2生殖系統(tǒng)中的研究較少；特別是在卵巢的發(fā)育中的作用尚未有報道。因此，本研究探索了在卵泡發(fā)育過程中，lmp2基因的表達規(guī)律及其可能的作用。 研究方法：本文應(yīng)用HE染色、

2、免疫組化、細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)TUNEL、原代顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)及westernblot的方法檢測了lmp2在大鼠不同發(fā)育時期卵泡及人工體外誘導(dǎo)卵泡閉鎖凋亡的卵泡中的表達情況。將未成年大鼠（21日齡）注射孕馬血清（PMSG），注射12、24、36和48小時后分別收集卵巢，注射PMSG24小時的基礎(chǔ)上再注射anti—PMSG抗體24小時后收集卵巢，進行石蠟切片；分別選取相鄰的連續(xù)切片，蘇木素—伊紅（HE）染色觀察PMSG誘導(dǎo)后大鼠卵泡不同發(fā)育階

3、段的形態(tài)及體外誘導(dǎo)閉鎖的卵泡形態(tài)；免疫組化方法檢測lmp2的表達情況；細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)TUNEL檢測lmp2的表達模式與卵泡閉鎖及卵泡顆粒細(xì)胞程序性死亡的相互關(guān)系。另外，體外相同條件誘導(dǎo)大鼠卵泡發(fā)育到不同時期及閉鎖后，用針頭刺破卵泡，400目細(xì)胞篩網(wǎng)分離顆粒細(xì)胞，用NP40裂解液裂解卵泡顆粒細(xì)胞收集全細(xì)胞總蛋白；westernblot方法檢測lmp2在發(fā)育不同階段及閉鎖卵泡中的表達。 結(jié)果顯示：在大鼠卵巢發(fā)育的初級卵泡階段，lm

4、p2的表達較高，在大腔卵泡時期lmp2表達較低；與之對應(yīng)的TUNEL實驗結(jié)果，表明lmp2表達高的卵泡有凋亡信號；在體外誘導(dǎo)卵泡發(fā)生閉鎖凋亡的卵泡中，TUNEL染色與lmp2的表達位置有較強的對應(yīng)關(guān)系；在westernblot的結(jié)果中，在卵泡發(fā)育前期即初級卵泡階段，lmp2的表達較高，而在大腔卵泡時期，lmp2的表達處在相對較低的水平。 結(jié)論：westernblot結(jié)果與免疫組化結(jié)果表明lmp2在不同發(fā)育時期卵泡中有相似表達規(guī)律

5、。討論：本論文首次在卵巢中探索lmp2是否發(fā)揮作用及怎樣發(fā)揮作用，并作了較為深入的研究。經(jīng)過理論探討和實驗探索驗證，結(jié)果證明，在卵巢的卵泡發(fā)育過程中，lmp2有明顯的表達且有差異。通過以上實驗結(jié)果表明，lmp2可能參與卵泡發(fā)育、閉鎖和顆粒細(xì)胞凋亡等重要過程。lmp2在卵泡發(fā)育過程中可能通過引起顆粒細(xì)胞的凋亡，誘導(dǎo)卵泡發(fā)生閉鎖凋亡。以上結(jié)果暗示，lmp2可能成為治療卵巢相關(guān)疾病的新的靶點，并且為在以后的研究卵巢相關(guān)疾病的發(fā)病機理的過程中，