產(chǎn)前感染對(duì)新生大鼠肺發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　產(chǎn)前感染引起母親全身炎癥，使中性粒細(xì)胞向胎膜及胎盤聚集，引發(fā)胎膜胎盤炎癥，即為絨毛膜羊膜炎。絨毛膜羊膜炎使羊水和臍血中炎癥介質(zhì)水平增加，激活胎兒先天免疫系統(tǒng)，引起胎兒炎癥反應(yīng)綜合征(fetal inflammatory responsesyndrome，F(xiàn)IRS)。FIRS的主要靶器官是胎肺，胎兒免疫系統(tǒng)激活后炎癥細(xì)胞和肺組織細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，其中IL-6是FIRS中的關(guān)鍵細(xì)胞因子，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究均發(fā)現(xiàn)羊水

2、和臍血中IL-6水平升高與BPD相關(guān)，但I(xiàn)L-6如何影響肺發(fā)育尚不清楚。中性粒細(xì)胞能夠生成大量的活性氧物質(zhì)，造成氧化應(yīng)激，直接損傷肺組織。巨噬細(xì)胞不僅是促炎癥細(xì)胞因子的主要來源，還可能參與肺泡化抑制。髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒中的一種酶，作為中性粒細(xì)胞分子標(biāo)志物，而CD68是單核/巨噬細(xì)胞特異性表達(dá)的糖蛋白，作為巨噬細(xì)胞分子標(biāo)志物。
　　本研究通過腹腔注射脂多糖(lipopolys

3、accharide，LPS)致孕晚期大鼠產(chǎn)前感染模型，分析產(chǎn)前炎癥對(duì)新生大鼠肺泡結(jié)構(gòu)發(fā)育的影響及炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)水平的變化，探討產(chǎn)前感染對(duì)新生大鼠肺發(fā)育的影響機(jī)制。
　　方法：
　　一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立
　　雌鼠受孕后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，分別于孕鼠孕19d和20d腹腔注射LPS2.5mg/kg和等量生理鹽水。
　　二、樣本收集
　　兩組孕鼠足月自然分娩后，于生后日齡1d、3d、7d、14d、21d及2

4、8d兩組各取8只新生鼠，10％水合氯醛溶液麻醉處死后，取左肺組織，于中性甲醛溶液固定，用于蘇木素-伊紅染色和免疫組織化學(xué)染色。
　　三、實(shí)驗(yàn)方法
　　石蠟包塊常規(guī)切片4μm，行蘇木素-伊紅染色和免疫組化染色。光鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選取8個(gè)視野，計(jì)數(shù)肺組織中以MPO為標(biāo)志的中性粒細(xì)胞數(shù)和CD68為標(biāo)志的巨噬細(xì)胞數(shù)量，圖像分析軟件測定肺泡數(shù)量，肺泡面積占組織面積比例，肺泡間隔厚度，并計(jì)算IL-6平均光密度以表示IL-6表達(dá)強(qiáng)度

5、。
　　四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有研究結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，兩組間數(shù)據(jù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)，同組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間互相比較采用最小顯著差異法（LSD檢驗(yàn)），P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、隨日齡增長，新生鼠肺泡數(shù)量增多、肺泡占組織面積比例逐漸增加，肺泡間隔厚度減小，IL-6表達(dá)逐漸

6、減弱，實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞數(shù)量逐漸減少。
　　2、日齡1d、3d、7d及14d，實(shí)驗(yàn)組平均肺泡數(shù)量(88、89、102、127，單位:個(gè)/mm2)明顯少于同日齡對(duì)照組（105、109、123和156，單位:個(gè)/mm2），P分別為0.024、0.009、0.013和0.004。
　　3、日齡1d、3d和7d，實(shí)驗(yàn)組肺泡占組織面積比例（0.552、0.603和0.533）明顯大于同日齡對(duì)照組（0.478、0.485和0.404），P分

7、別為0.003、0.001和0.000。
　　4、日齡1d及3d，實(shí)驗(yàn)組肺泡間隔厚度（12.30和10.75，單位:μm）明顯小于同日齡對(duì)照組（17.13和16.13，單位:μm），P分別為0.000和0.000。
　　5、日齡1d、3d、7d及14d，實(shí)驗(yàn)組中性粒細(xì)胞數(shù)量（681、582、393和379，單位:個(gè)/mm2）明顯多于同日齡對(duì)照組（164、211、145和179，單位:個(gè)/mm2），P分別為0.000、0.00

8、0、0.000及0.003。日齡1d、3d及7d，實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞數(shù)量（613、578和337，單位:個(gè)/mm2）明顯多于同日齡對(duì)照組（170、182和127，單位:個(gè)/mm2），P分別為0.000、0.000和0.000。
　　6、日齡1d、3d、7d，實(shí)驗(yàn)組IL-6平均光密度(0.69，1.05，0.49)明顯大于同日齡對(duì)照組(0.34，0.30，0.33)，P分別為0.000，0.001，0.042。
　　結(jié)論：