新生期不同劑量雙酚A暴露對雌性大鼠青春發(fā)育的影響.pdf

1、目的:研究新生期不同劑量雙酚A(bisphenol A,BPA)暴露對雌性SD大鼠陰道開口時(shí)間(vaginal opening day,VOD)、下丘腦kiss-1 mRNA及其蛋白kisspeptin表達(dá)和子宮、卵巢雌激素受體α(Estrogen Receptor,ERα)mRNA、雌激素受體β(Estrogen Receptor,ERβ)mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:將新生雌性SD大鼠隨機(jī)分為6組,即空白對照組、溶劑

2、組、17β-雌二醇組(17β-estradiol,E2,10μg?d-1)、低劑量BPA組(25μg?kg-1?d-1)、中劑量BPA組(50μg?kg-1?d-1)和高劑量BPA組(250μg?kg-1?d-1),在生后第0-6天(postnatal day0-6, PND0-6)經(jīng)皮下注射每日給藥。記錄VOD,并于當(dāng)天處死大鼠,取出下丘腦、子宮、卵巢并稱重,計(jì)算下丘腦、子宮、卵巢臟器系數(shù)。對下丘腦組織行免疫組化檢測觀察kisspep

3、tin定位,子宮、卵巢行HE染色觀察形態(tài)變化。通過Real—Time PCR的方法測定下丘腦kiss-1 mRNA和子宮、卵巢中ERα、ERβmRNA表達(dá)量。通過Western-blot的方法測定下丘腦中kisspeptin及子宮、卵巢中ERα、ERβ蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:1.對體重的影響:自PND0至PND6每日對大鼠進(jìn)行皮下注射方式的藥物干預(yù),對照組與各干預(yù)組間大鼠 PND0與PND6體重未有明顯差異(P>0.05)。2.

4、VOD記錄顯示與對照組相比,E2組、50μg?kg-1?d-1和250μg?kg-1?d-1 BPA組VOD較對照組提前(P<0.05);溶劑組、25μg?kg-1?d-1 BPA組VOD與對照組相比未有顯著差異(P>0.05)。3.下丘腦免疫組化結(jié)果提示 kisspeptin多位于神經(jīng)細(xì)胞上。4. HE染色結(jié)果顯示空白對照組、溶劑組、25μg?kg-1?d-1、50μg?kg-1?d-1和250μg?kg-1?d-1 BPA組子宮肌層

5、厚度、內(nèi)膜厚度較E2組厚,卵巢卵泡發(fā)育度較E2組高。5.臟器系數(shù)結(jié)果顯示,各干預(yù)組下丘腦臟器系數(shù)與對照組相比無顯著差異(P>0.05),但E2組子宮、卵巢臟器系數(shù)較對照組明顯降低(P<0.05),溶劑組、BPA干預(yù)組較對照組無明顯改變(P>0.05)。6. RT-PCR結(jié)果顯示,溶劑組、25μg?kg-1?d-1、、50μg?kg-1?d-1和250μg?kg-1?d-1 BPA組下丘腦kiss-1 mRNA及子宮、卵巢 ER mRNA

6、表達(dá)水平較對照組未有明顯差異(P>0.05); E2組下丘腦kiss-1、子宮ERα、卵巢ERβmRNA表達(dá)水平較對照組明顯降低(P<0.05),子宮ERβ、卵巢ERα mRNA水平較對照組未有明顯差異(P>0.05)。7. Western-Blot結(jié)果顯示,溶劑組、25μg?kg-1?d-1、50μg?kg-1?d-1和250μg?kg-1?d-1 BPA組下丘腦kisspeptin及子宮、卵巢 ER蛋白水平較對照組未有明顯差異(P>

7、0.05); E2組下丘腦 kisspeptin、子宮 ERα、卵巢 ERβ蛋白水平較對照組明顯降低(P<0.05),子宮 ERβ、卵巢 ERα蛋白水平較對照組未有明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:①每日皮下注射操作未對注射藥物期間大鼠基本體重增長產(chǎn)生明顯影響。②下丘腦神經(jīng)細(xì)胞上有kisspeptin表達(dá)。③新生期50μg?kg-1?d-1、250μg?kg-1? d-1 BPA暴露可引起大鼠青春期啟動提前。④上述青春期啟動提