圍生期雙酚A暴露對子代小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)發(fā)育的影響.pdf

1、環(huán)境雌激素是環(huán)境中干擾體內(nèi)激素生成、釋放、輸送、代謝、結(jié)合或消除過程的外源性化合物，表現(xiàn)出擬雌激素或抗雌激素作用。雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種典型的環(huán)境雌激素，廣泛用于、食品和飲料包裝材料、金屬罐頭樹脂內(nèi)膜、牙齒固封劑、添加劑等。BPA能夠通過食品和飲料進(jìn)入人體，也可以從垃圾滲析到周圍生態(tài)系統(tǒng)污染環(huán)境而危害健康。BPA具類雌激素活性，通過與雌激素受體結(jié)合干擾內(nèi)源性雌激素活性。
　　 近來有研究發(fā)現(xiàn)，低于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

2、值的BPA對嚙齒類動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育存在低劑量效應(yīng)。圍生期母體BPA暴露可影響子代大鼠大腦皮層結(jié)構(gòu)以及皮層和海馬神經(jīng)元的形態(tài)發(fā)育，改變其多種神經(jīng)行為及其性別分化，說明發(fā)育中的腦是對BPA敏感的靶器官。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，圍生期母體BPA（0.05～50 mg/kg/d）暴露后，仔鼠的活動(dòng)性、探究、焦慮和抑郁、學(xué)習(xí)記憶等多種非生殖行為發(fā)生改變;體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元暴露于BPA后快速促進(jìn)樹突絲狀的運(yùn)動(dòng)性和密度。鑒于突觸是腦可塑性變化和信

3、息傳遞的關(guān)鍵部位，與學(xué)習(xí)記憶等行為密切相關(guān)，而突觸結(jié)構(gòu)修飾包括突觸界面結(jié)構(gòu)、突觸數(shù)密度、突觸傳遞等容易受環(huán)境和藥物的影響，因此，本研究通過圍生期母體BPA暴露，觀察BPA對雄性仔鼠生后發(fā)育過程中海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響，并通過檢測相關(guān)腦區(qū)突觸前標(biāo)志蛋白synapsinⅠ和突觸后標(biāo)志蛋白PSD-95，以及與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的突觸后谷氨酸NMDA和AMPA受體的表達(dá)水平進(jìn)一步探討B(tài)PA影響突觸結(jié)構(gòu)的分子機(jī)制。
　　 方法:取清潔級(jí)ICR雄

4、鼠(30-35 g)和雌鼠(25-30 g)適應(yīng)1周后合籠，母鼠從妊娠第7天至斷乳期（產(chǎn)后21天）進(jìn)行雙酚A(Bisphenol A，BPA，0.04、0.4、4 mg/kg/day)灌胃染毒，同時(shí)設(shè)對照組給予溶媒花生油。子代雄鼠每組10只，分別在生后14天、21天、56天處死，按要求取海馬組織樣品，分別制備電鏡超薄切片觀察海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的突觸數(shù)密度和突觸界面參數(shù)，應(yīng)用western-blot和免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測海馬PSD-

5、95、synapsinⅠ、NMDA受體亞基NR1和AMPA受體亞基GluR1蛋白表達(dá)。
　　 用Quantity one軟件測量目的蛋白條帶光密度值，用Image-Pro Plus6.0分析測定突觸形態(tài)和免疫組織化學(xué)圖片。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件中的One-wayANOVA法分析，測定值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差（M±SE）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性。
　　 結(jié)果:1、圍生期母體BPA暴露

6、后，與對照組相比，BPA（0.04和4 mg/kg/d）顯著減少PND14和PND56的突觸數(shù)密度（P＜0.01或P＜0.001），但對PND21沒有顯著差異。說明圍生期BPA暴露抑制子代小鼠突觸形成。
　　 2、圍生期母體BPA暴露改變突觸界面結(jié)構(gòu)。BPA所有劑量組均極顯著增大不同發(fā)育階段的突觸間隙寬度(P＜0.01);所有劑量組使PSD厚度極顯著減小(P＜0.01);縮短不同發(fā)育階段的突觸活性帶長度，其中，生后21天影響最顯

7、著(P＜0.05或P＜0.01);但對突觸界面曲率影響較小，主要是發(fā)育早期（PND14和21）有顯著上升(P＜0.05)。說明突觸界面參數(shù)對BPA的敏感程度不一樣，其中突觸間隙和PSD厚度最為敏感。
　　 3、Western blot分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圍生期BPA暴露，所有劑量組顯著降低生后21天和56天synapsinⅠ蛋白表達(dá)(P＜0.05或P＜0.01);顯著下調(diào)PSD-95蛋白表達(dá)，其中生后56天下降最顯著（P＜0.05，P

8、＜0.01或P＜0.001）;BPA（0.4和4 mg/kg/d）顯著降低PND21的NR1表達(dá)，所有劑量組使56天表達(dá)極顯著下降(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，但對PND14無顯著影響;GluR1蛋白表達(dá)被抑制，低劑量組和高劑量組顯著或極顯著降低發(fā)育階段的表達(dá)量(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4、免疫組化技術(shù)分析結(jié)果與WB結(jié)果相似。
　　 結(jié)論:低于日允許攝入劑量(tolerable daily