孕期暴露于脂多糖對子代大鼠神經(jīng)發(fā)育損害的初步研究.pdf

1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的發(fā)病率越來越高，嚴重影響人類健康和生活質(zhì)量，已成為僅次于心血管疾病和癌癥的第三位因素。中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病主要包括阿爾茨海默病(Alzheimet’sdisease，AD)、帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)、亨廷頓病(Huntingtondisease，HD)等。目前我國老年癡呆患者有600萬人，占全球患者總數(shù)的三分之一，每年新發(fā)病約180萬人，死亡105.6萬人，發(fā)病形勢已經(jīng)十分嚴峻，但

2、其確切的病因和發(fā)病機制尚不清楚，現(xiàn)有藥物的治療效果也難以令人滿意。因此，探索中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的發(fā)病機制、尋找新藥作用的靶點成為當今世界科學家們面臨的主要問題和研究熱點之一。 我室既往研究發(fā)現(xiàn)，孕鼠暴露于炎癥免疫刺激劑可導致子鼠出生后血壓升高、體重增加。在該模型上，進一步發(fā)現(xiàn)孕期母體炎癥刺激時產(chǎn)生大量的炎癥因子，這些因子可通過胎盤屏障和血腦屏障，使得母體、胎盤、胎兒腦組織中的炎癥因子水平顯著升高；并通過基因芯片技術觀察到孕鼠

3、妊娠期給予腹腔注射LPS和zymosan后，與軸突生長密切相關的生長相關蛋白43(growthassociatedprotein43，Gap43)、與胼胝體和前腦發(fā)育相關的核因子I/B(nuclearfactorI/B，Nfia)與基底橋和海馬發(fā)育相關的Nfib的表達均下調(diào)，提示孕期母體炎癥免疫反應有可能影響了新生兒的腦組織發(fā)育。 鑒于此，本研究擬在我室原有的研究工作的基礎上，進一步觀察母體孕期給于LPS刺激后，子代大鼠血壓、體

4、質(zhì)量、生存時間及部分行為學指標的長期改變，并對子代大鼠3m齡、10m齡、20m齡時期的學習記憶能力和腦部海馬結(jié)構的改變重點進行了觀察，并初步探究了腦部炎癥相關細胞星形膠質(zhì)細胞在其中的作用。 方法： 1、16只通過檢查陰栓獲得準確妊娠時間的SD孕鼠，隨機分為兩組，在妊娠的第8d、10d、12d分別腹腔注射LPS(0.79mg/kg)和無菌生理鹽水。 2、在最后一次注射后1小時鼠尾取血，用ELISA方法檢測孕鼠血清中

5、FNF-α水平。 3、子鼠出生后從2m齡開始，每2m稱量體質(zhì)量1次，鼠尾無創(chuàng)血壓測量技術監(jiān)測血壓1次，至20m。 4、記錄從子鼠出生后至子鼠20m齡時自然死亡、意外死亡及丟失的子鼠只數(shù)，用于對其生存率、整體生存時間的分析。 5、子鼠分別在3m、10m、20m齡時進行一系列的行為學實驗，包括檢測溫痛覺的熱板實驗、檢測運動及對陌生環(huán)境興奮性的曠場實驗、檢測學習記憶能力的Morris水迷宮定位航行實驗和空間探索實驗。

6、 6、HE染色觀察子鼠3m、10m、20m齡時海馬組織學改變；免疫組化法觀察子鼠3m、10m、20m齡時海馬各區(qū)星形膠質(zhì)細胞、突觸素的改變。 結(jié)果： 1、孕鼠腹腔注射LPS后1h，血清中TNF-α較對照組明顯升高(p＜0.01)，表明低劑量的LPS有效的激活了母體的炎癥免疫反應。 2、對照組、LPS組每只孕鼠生育仔鼠的數(shù)量、雌雄比例及胎鼠的體質(zhì)量，各組之間均沒有明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。表明低劑量的L

7、PS并沒有對子鼠造成流產(chǎn)、畸胎等胎鼠急性損傷。 3、L,PS組子鼠尾動脈收縮壓從2m齡時即較對照組子鼠的收縮壓顯著升高(p＜0.01)，該升高趨勢一直持續(xù)到20m齡時(LPS組血壓為137.02±19.34，對照組血壓為112.29+3.13)，LPS組子鼠血壓已達到高血壓模型定義的高血壓標準。 4、LPS組子鼠體質(zhì)量在2m齡時較對照組子鼠顯著升高(P＜0.05)，但在之后的觀察中并未發(fā)現(xiàn)兩組子鼠的體質(zhì)量有統(tǒng)計學意義上的

8、差別。 5、通過對兩組孕鼠所生育的子鼠進行生存分析后，兩組子鼠平均生存時間差異無統(tǒng)計學意義(LPS組：19.50m；LPS組：18.33m，P＞0.05)。 6、行為學實驗結(jié)果表明孕期給予LPS刺激對子鼠的溫痛覺、對陌生環(huán)境的興奮性均無明顯影響，但卻導致子鼠的學習記憶能力較同齡對照組明顯下降(p＜0.01)，并且這種改變隨著年齡的增長而愈加明顯(年齡與孕期處理因素的交互效應p＜0.01)。 7、在子鼠不同的年齡階

9、段，LPS組子鼠的海馬各區(qū)神經(jīng)元明顯排列紊亂，形態(tài)正常的神經(jīng)元數(shù)量減少，細胞核固縮，染色深，結(jié)構不清。海馬各區(qū)星形膠質(zhì)細胞GFAP表達較同齡對照組顯著升高，而突觸素蛋白的表達較同齡對照組顯著降低。表明孕期母體炎癥免疫反應可能通過改變星形膠質(zhì)細胞、突觸素和海馬部位神經(jīng)元的發(fā)育而導致長期的學習記憶能力降低。 結(jié)論： 1、孕期腹腔注射LPS后，子鼠的血壓逐漸升高，至8m齡形成高血壓，成功的建立了孕期炎癥刺激導致子代高血壓動物模