已烯雌酚對性成熟前小鼠和大鼠卵泡發(fā)育的影響.pdf

1、小鼠和大鼠是生物學(xué)研究最常用的動物模型,而大量同步化發(fā)育的卵母細(xì)胞是開展生殖與發(fā)育基礎(chǔ)研究不可或缺的實驗材料。為此,我們首先嘗試?yán)眉合┐品訉β雅莅l(fā)育的誘導(dǎo)作用,建立小鼠和大鼠卵泡同步化發(fā)育及卵母細(xì)胞體外成熟的培養(yǎng)技術(shù)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),性成熟前小鼠和大鼠腹腔注射一定劑量的己烯雌酚后,卵泡發(fā)育出現(xiàn)同步化現(xiàn)象,卵巢中三級卵泡的總數(shù)明顯多于對照組,其差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。手工穿刺獲取三級卵泡中的卵母細(xì)胞,經(jīng)體外培養(yǎng)成熟,再行體外受精,結(jié)果發(fā)現(xiàn),

2、經(jīng)己烯雌酚處理獲得的卵母細(xì)胞的離體成熟率和受精率與對照組比較沒有顯著差異。通過比較己烯雌酚和雌二醇在促卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞體外成熟中的作用,我們推斷己烯雌酚的促卵泡同步發(fā)育作用可能是通過其雌激素樣活性介導(dǎo)的。
　　 文獻報道,泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)在精子發(fā)生和受精等方面有著重要的作用,并可能是通過與c-Jun活化區(qū)結(jié)合蛋白1(Jab1)結(jié)合而影響細(xì)胞周期素依賴激酶抑制因子p27Kip1的泛素依賴性降解,參與調(diào)控細(xì)胞

3、的凋亡。由于卵泡發(fā)育過程涉及細(xì)胞增殖和凋亡,為了探討己烯雌酚誘導(dǎo)小鼠卵泡發(fā)育的作用途徑,我們檢測分析了己烯雌酚對小鼠卵巢中UCH-L1、Jab1和p27Kip1表達模式的影響。免疫組化研究結(jié)果表明,己烯雌酚對這3種蛋白分子在小鼠卵巢中的表達定位沒有影響,UCH-L1和Jab1主要定位于卵泡的卵母細(xì)胞中,而p27Kip1廣泛分布于卵巢各類細(xì)胞中。免疫印跡分析結(jié)果表明,己烯雌酚處理后,小鼠卵巢中這3種蛋白的含量有不同程度的上升。同時還發(fā)現(xiàn),

4、在性成熟前小鼠卵巢中,UCH-L1和p27Kip1的蛋白水平隨周齡增加而呈上升趨勢,但Jab1蛋白水平的變化不明顯。由此提示,UCH-L1可能參與己烯雌酚誘導(dǎo)的小鼠卵泡發(fā)育調(diào)節(jié)。
　　 為了進一步揭示己烯雌酚誘導(dǎo)卵泡發(fā)育的分子機制,我們應(yīng)用基因芯片檢測技術(shù),研究分析己烯雌酚對小鼠卵巢中細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因表達譜的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)己烯雌酚處理后,小鼠卵巢中有38個細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的mRNA水平發(fā)生顯著變化,其中增殖相關(guān)基

5、因24個,凋亡相關(guān)基因14個。通過實時定量RT-PCR方法,選擇驗證了其中14個基因的表達變化,最終確定.Insl3、Illb,Cuzd1和Elf3基因的表達水平受到己烯雌酚的影響,提示這4個基因可能參與己烯雌酚促進卵泡同步發(fā)育的過程。
　　 綜上所述,己烯雌酚具有促進小鼠和大鼠卵泡同步發(fā)育的作用,經(jīng)其誘導(dǎo)可獲得較大量的具正常體外成熟和受精能力的卵母細(xì)胞;己烯雌酚促小鼠卵泡發(fā)育的作用可能涉及UCH-L1/Jab1/p27Kip1