葛根素對性成熟期雌性小鼠生殖系統(tǒng)及其胚胎-胎仔發(fā)育的影響.pdf

1、研究目的:觀察不同劑量的葛根素對性成熟期雌性昆明小鼠生殖系統(tǒng)的影響以及對小鼠胚胎-胎仔發(fā)育的影響,探討葛根素對生殖期小鼠的作用模式及其生殖毒性,為葛根素在臨床的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　 研究方法:(1)通過陰道涂片法觀察小鼠的動情周期變化、子宮增重法觀察小鼠子宮的變化、酶聯(lián)免疫法測定小鼠血清雌二醇(estradiol,E2)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黃體生成素(lutein

2、izing hormone,LH)等主要雌激素水平的變化,評定葛根素對性成熟期雌性昆明小鼠生殖系統(tǒng)的影響。采用8-9周齡雌性昆明小鼠40只,按照隨機數(shù)字表法隨機分為4組,分別為:低劑量葛根素組(150mg/kg)、高劑量葛根素組(450mg/kg)、己烯雌酚組(35mg/kg)、溶劑對照組(羧甲基纖維素鈉),各組均灌胃給藥,每日1次,每次0.2ml。每日上午08:00做陰道脫落細(xì)胞涂片檢查,觀察并記錄小鼠動情周期變化情況。每周稱量小鼠體

3、重,根據(jù)體重調(diào)整各組小鼠藥物用量。連續(xù)給藥6周,于動情前期末次給藥后24小時,眼眶取血,脫頸椎處死小鼠,快速稱取子宮、卵巢濕重,分別計算子宮系數(shù)、卵巢系數(shù)。所有血清標(biāo)本-20℃保存,一側(cè)卵巢、子宮迅速移至-80℃度保存,另一側(cè)卵巢、子宮置于10％福爾馬林溶液中固定,制作石蠟切片HE染色觀察子宮病理組織學(xué)變化。(2)對妊娠雌鼠自胚胎著床至硬腭閉合期(小鼠妊娠第6-15天)給予不同劑量葛根素,評定葛根素對妊娠雌鼠、胚胎及胎仔發(fā)育的影響。實驗

4、采用8-9周齡昆明小鼠160只,雌雄各半,按照隨機數(shù)字表法將雌鼠隨機分為4組,每組20只。將同種同月齡雄鼠與雌鼠按1:1比例合籠,于合籠后第二天開始,每天上午08:00觀察雌鼠陰道口有無陰栓,對于無明顯陰栓的小鼠應(yīng)做陰道涂片,檢查雌鼠陰道內(nèi)有無活精子。若發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道涂片精子陽性,則定為妊娠“0d”,合籠飼養(yǎng)2周,于妊娠第6-15天灌胃給藥。于妊娠第18天,脫頸椎處死孕鼠,從子宮頂端分離胎鼠,肉眼檢查有無死胎、吸收胎,統(tǒng)計各窩活胎個數(shù),

5、檢查活胎有無外觀畸形、骨骼畸形、內(nèi)臟畸形,計算各窩活胎平均體重、用游標(biāo)卡尺測量胎鼠平均頂臀長。
　　 研究結(jié)果:(1)體重:低劑量葛根素組體重明顯低于對照組(p<0.05),顯著低于高劑量葛根素組和己烯雌酚組(p<0.01),高劑量葛根素組、己烯雌酚組和對照組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。(2)臟器系數(shù):卵巢系數(shù),各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異；子宮系數(shù),己烯雌酚組子宮系數(shù)顯著高于低劑量葛根素組和對照組(p<0.01),明顯高于高劑量葛根素組(p

6、<0.05),低劑量葛根素組子宮系數(shù)低于對照組,高劑量葛根素組高于對照組但無統(tǒng)計學(xué)差異。(3)小鼠動情周期變化情況:灌胃第42天,低劑量葛根素組、高劑量葛根素組、己烯雌酚組、對照組小鼠的動情周期紊亂率分別為70％、80％、100％、0,可見低劑量葛根素、高劑量葛根素、己烯雌酚均能導(dǎo)致小鼠動情周期紊亂,低劑量葛根素組和高劑量葛根素組的動情周期紊亂率明顯低于己烯雌酚組。(4)血清E2水平:低劑量葛根素組明顯低于對照組(p<0.05),顯著低

7、于高劑量葛根素組及己烯雌酚組(p<0.01),高劑量葛根素組和己烯雌酚組顯著高于對照組(p<0.01),高劑量葛根素組顯著低于己烯雌酚組(p<0.01)。(5)血清FSH水平:低劑量葛根素組顯著低于高劑量葛根素組、己烯雌酚組和對照組(p<0.01),高劑量葛根素組和己烯雌酚組顯著高于對照組和低劑量葛根素組(p<0.01),高劑量葛根素組和己烯雌酚組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。(6)血清LH水平:低劑量葛根素組顯著低于高劑量葛根素組、己烯雌酚組(p

8、<0.01),明顯低于對照組(p<0.05),高劑量葛根素組和己烯雌酚組顯著高于對照組和低劑量葛根素組(p<0.01),高劑量葛根素組和己烯雌酚組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。(7)子宮病理組織學(xué)檢查:己烯雌酚組子宮肥大,子宮內(nèi)膜組織間質(zhì)水腫,腺體數(shù)目增多、彎曲,腺腔擴大、形態(tài)不一,腺上皮細(xì)胞增生呈高柱狀假復(fù)層,基底層稍有增厚,低劑量葛根素組、高劑量葛根素組和對照組均未出現(xiàn)類似組織學(xué)特點。(8)子宮內(nèi)膜厚度:己烯雌酚組子宮內(nèi)膜厚度顯著高于低劑量葛根

9、組、高劑量葛根素組和對照組(p<0.01),低劑量葛根素組、高劑量葛根素組和對照組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。(9)孕鼠體重:妊娠第6、9、12、15天體重,各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異；妊娠第18天體重,己烯雌酚組顯著低于對照組(p<0.01),明顯低于低劑量葛根素組和高劑量葛根素組(p<0.05),低劑量葛根素組、高劑量葛根素組和對照組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。(10)小鼠胚胎形成情況:活胎數(shù),低劑量葛根素組、高劑量葛根素組活胎數(shù)低于正常組,但無統(tǒng)計學(xué)差

10、異,明顯高于己烯雌酚組(p<0.05),高、低劑量葛根素組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。己烯雌酚組顯著低于對照組(p<0.01)；吸收胎數(shù)各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異；各組均未見死胎。(11)小鼠胎仔發(fā)育的情況:平均胎仔體重,低劑量葛根素組低于高劑量葛根素組和對照組,但無統(tǒng)計學(xué)差異,高劑量葛根素組高于己烯雌酚組,低于正常組,但無統(tǒng)計學(xué)差異,己烯雌酚組顯著低于對照組(p<0.01)；平均胎仔頂臀長,低劑量葛根素組低于高劑量葛根素組和對照組,高于己烯雌酚組