小鼠斷乳后暴露大豆異黃酮對(duì)其卵巢發(fā)育的影響研究.pdf

1、目的：
　　研究雌性小鼠斷乳后暴露大豆異黃酮對(duì)其卵巢早期發(fā)育的影響，為大豆異黃酮對(duì)卵巢早期發(fā)育毒性作用影響的進(jìn)一步研究及其機(jī)制的探討提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　?。ㄒ唬┒唐诒┞秾?shí)驗(yàn)方法
　　1.剛斷乳雌性ICR小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，染毒劑量分別為200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg、0mg/kg大豆異黃酮,以10ml/kg/d灌胃染毒,連續(xù)染毒14天。觀察指標(biāo)：體重變化，陰道開放情況，血

2、清E2、P4水平，卵巢卵泡發(fā)育和細(xì)胞凋亡情況，及Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9 mRNA的表達(dá)。
　　2.剛斷乳雌性ICR小鼠40只，按體重隨機(jī)分為4組，染毒處理同方法1。染毒結(jié)束注射PMSG10IU/ml，48小時(shí)后腹腔注射HCG8IU/ml。隨后將雌性小鼠按照2:1與雄性小鼠同籠。觀察指標(biāo)：受孕率、受精卵數(shù)目和受精卵形態(tài)。
　　（二）亞慢性暴露實(shí)驗(yàn)方法
　　1.剛斷乳雌性ICR小鼠36只

3、，按體重隨機(jī)分為3組，第一組為對(duì)照組，以10ml/kg/d連續(xù)灌胃蒸餾水35天，第二組為短期暴露組，即染毒劑量為200mg/kg大豆異黃酮，以10ml/kg/d連續(xù)灌胃染毒14天，接著給予灌胃蒸餾水21天，第三組為亞慢性暴露組，即染毒劑量為200mg/kg大豆異黃酮,以10ml/kg/d連續(xù)灌胃染毒35天。觀察指標(biāo)：體重變化，陰道開放情況，血清E2、P4水平，卵巢卵泡發(fā)育和細(xì)胞凋亡情況，及Caspase-3、Caspase-8及Casp

4、ase-9 mRNA的表達(dá)。
　　2.剛斷乳雌性ICR小鼠30只，按體重隨機(jī)分為3組，染毒處理同方法1。染毒結(jié)束后注射PMSG10IU/ml，48小時(shí)后腹腔注射HCG8IU/ml。隨后將雌性小鼠按照2:1與雄性小鼠同籠。觀察指標(biāo)：受孕率、受精卵和受精卵形態(tài)。
　　結(jié)果：
　?。ㄒ唬┒唐诒┞秾?shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.小鼠體重各劑量組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.小鼠陰道開放率隨染毒劑量的增加呈上升

5、趨勢(shì)，高劑量組及中劑量組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.高劑量組小鼠血清E2平均水平和對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，高劑量小鼠血清P4平均水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　4.高劑量組小鼠卵巢生長(zhǎng)卵泡構(gòu)成比與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.小鼠卵巢電鏡觀察對(duì)照組與劑量組未見明顯異常形態(tài)變化，卵巢細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

6、
　　6.高劑量組Caspase-3和Caspase-9 mRN A相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，Caspase-8mRNA與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.各劑量組小鼠受孕率與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，高劑量組小鼠受精卵數(shù)目與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　?。ǘ﹣喡员┞秾?shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.小鼠體重各劑量組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、（P＞0.05）。
　　2.亞慢性暴露組和短期暴露組小鼠陰道開放時(shí)間均比對(duì)照組提前，且與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.亞慢性暴露組小鼠血清E2平均水平與短期暴露組及對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），對(duì)照組及短期暴露組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；亞慢性暴露組小鼠血清P4平均水平高于對(duì)照組及短期暴露組，但各組間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.亞慢性暴露組中閉鎖卵泡

8、構(gòu)成比高于其他兩組，但各組間卵巢各級(jí)卵泡構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.亞慢性暴露組卵巢顆粒細(xì)胞染色質(zhì)增多,成塊狀,染色質(zhì)邊集,細(xì)胞漿破壞較明顯,可見凋亡小體，亞慢性暴露組閉鎖卵泡卵巢細(xì)胞凋亡率高于其他兩組，與短期暴露組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　6.亞慢性暴露組卵巢組織Caspase-3,Caspase-8及Caspase-9mRNA相對(duì)表達(dá)量

9、均高于其他兩組，但各組間Caspase-3，Caspase-8 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。亞慢性暴露組卵巢組織Caspase-9mRNA相對(duì)表達(dá)量與其他兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，短期暴露組和對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.各劑量組小鼠受孕率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，亞慢性暴露組小鼠受精卵數(shù)目與其他兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)

10、論：
　　1.短期暴露大豆異黃酮對(duì)斷乳后雌性小鼠主要發(fā)揮雌激素樣作用，使得卵巢發(fā)育提前，表現(xiàn)為陰道開放時(shí)間提前，血清雌激素水平升高，生長(zhǎng)卵泡、成熟卵泡構(gòu)成比升高，受精卵數(shù)目增加；若這種暴露停止的話，近期觀察卵巢功能和形態(tài)未發(fā)現(xiàn)明顯異常，對(duì)以后產(chǎn)生何種影響尚無定論，是否與成年后卵巢早衰等疾病發(fā)生有關(guān)需要深入探索。
　　2.亞慢性暴露大豆異黃酮對(duì)斷乳后雌性小鼠主要發(fā)揮抗雌激素樣作用，影響小鼠卵巢發(fā)育，表現(xiàn)為血清雌激素水平下降，閉