大豆異黃酮對體外關節(jié)軟骨細胞的影響.pdf

1、目的：探討不同濃度大豆異黃酮對體外培養(yǎng)軟骨細胞的影響，進一步揭示大豆異黃酮在骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨退變中的作用。 方法： 1、取3周齡、雌性幼兔三只，無菌條件下切取股骨頭、股骨髁部關節(jié)軟骨，分離軟骨細胞進行培養(yǎng)傳代，將第一代軟骨細胞隨機分成陽性對照組(17p-E<,2>組，E<,2>組)、陰性對照組(溶媒對照組)、10<'-5>mol/L～10<'-10>mol/L SI組，共8組，分別以每孔2×10<'3>個軟骨細胞接種于

2、96孔板，每組平行4孔；以每孔1×10<'4>個軟骨細胞接種于24孔，每組平行3孔，每孔底部預先放入無菌5mm×5mm蓋玻片。48h細胞貼壁后予以不同濃度藥物干預，隔天換藥一次，每天取一塊96孔板進行MTT測定，連續(xù)測定8天；藥物干預一周后取出24孔板內蓋玻片分別行雌激素β受體免疫組織化學染色、甲苯胺藍染色和瑞氏染色。 2、取第一代軟骨細胞隨機分成A、B兩組，B組先用IL-β<,1>干預，每組又分成E<,2>組、溶媒對照組、10

3、<'-5>mol/L～l0<'-10>mol/L SI組，共8個亞組，以每孔2×10<,5>個細胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每亞組平行2孔，48h后，A組予以不同濃度藥物干預5天，B組先以10ng/ml IL-β<,1>干預24h后予以不同濃度藥物干預5天，隔天換藥一次。提取培養(yǎng)軟骨細胞總RNA，RT-PCR檢測Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、biglycan、TGF-β<,1>、IGF-1 mRNA表達情況。 結果： 1、MTT結果顯示

4、：各組24小時內作用無明顯差異(p>0.05)：10<'-5>mol/LSI 組從 24 小時后測得的 OD 值與溶媒對照組和E<,2>組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。10<,-6>mol/L、10<,-10>mol/L SI組的OD值與與溶媒對照組的OD值無明顯差別，從24小時后測得的OD值與17β-E<,2>組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L

5、SI組從48小時后測得的OD值與溶媒對照組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。雌激素β受體免疫組化顯示未滴加一抗的爬片無棕黃色顆粒，其余各組均有雌激素β受體表達，陽性在體外培養(yǎng)的軟骨細胞中有棕黃色深染顆粒存在于細胞漿和(或)細胞核內。甲苯胺藍染色顯示胞漿中有不同程度的紫紅色顆粒，體外培養(yǎng)的軟骨細胞中蛋白多糖存在。 2、SI對軟骨細胞mRNA表達的影響：正常關節(jié)軟骨細胞均有biglycan、Ⅱ型膠原、FGF-β<,1>mRNA表

6、達，10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能刺激正常關節(jié)軟骨細胞mRNA表達，而10<'-5>mol/L SI則起抑制作用；IL-1β抑制軟骨細胞biglycan、II型膠原、TGF-β<,1>mRNA的表達，10<'-5>mol/L SI能協(xié)同IL-1β起抑制作用，10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L SI能部分對抗IL-1β的抑制作用。10<'-5>mol/L、10<,-6>

7、mol/L、10<'-7>mol/L SI能刺激正常關節(jié)軟骨細胞表達Ⅰ型膠原mRNA表達，變性老化的軟骨細胞都有Ⅰ型膠原mRNA表達，其中10<,-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能部分對抗IL-1β的作用。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能誘導關節(jié)軟骨細胞表達IGF-1mRNA。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L SI能誘導變性關節(jié)軟骨細胞表達IGF-1

8、mRNA。 結論： 1、不同濃度SI對軟骨細胞增殖的作用表現(xiàn)出雙重作用，10<'-5>mol/L的SI抑制軟骨細胞的增殖；而10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L的SI促進軟骨細胞的增殖，且隨著濃度的增加作用增加。 2、不同濃度SI對軟骨細胞膠原、蛋白多糖、IGF-1、TGF-βl mRNA表達的作用不同。 3、體外關節(jié)軟骨細胞存在雌激素受體，SI對軟骨細胞的作用與雌