大豆異黃酮指紋圖譜研究.pdf

1、大豆異黃酮為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外中藥研究的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)收集了25個(gè)不同品種的大豆樣品，進(jìn)行了異黃酮類化合物的提取，采用紫外分光光度法、高效液相色譜法以及液相色譜-質(zhì)譜分析手段，從含量測(cè)定、指紋圖譜不同角度研究了大豆作為植物藥材的內(nèi)在品質(zhì)，為科學(xué)評(píng)價(jià)大豆異黃酮質(zhì)量提供了有意義的探索。 本實(shí)驗(yàn)首先采用正交試驗(yàn)方案對(duì)大豆異黃酮提取過(guò)程中的可能影響因素(乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間以及提取次數(shù))進(jìn)行試驗(yàn)，確定了最佳提取工藝，然后建立了一階導(dǎo)數(shù)

2、光譜法測(cè)定大豆異黃酮含量的方法，為大豆異黃酮的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了定量依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法，在室溫條件下以C18柱(4.6mm×250mm，5μm)為固定相，甲醇-水(冰醋酸調(diào)pH為3.2)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.6mL/min，261nm處進(jìn)行檢測(cè)，建立了大豆乙醇提取物異黃酮的色譜指紋圖譜。實(shí)現(xiàn)了包括染料木黃酮在內(nèi)的23個(gè)色譜峰的分離，獲取了該植物藥材中與異黃酮有關(guān)的信息，并將所得的色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行化學(xué)模式識(shí)別研究

3、，用系統(tǒng)聚類分析將采集到的大豆樣品分成了3類，表明不同大豆品種之間與異黃酮有關(guān)的化學(xué)成分之間存在差異。在對(duì)色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析的基礎(chǔ)上，采用中國(guó)藥典委員會(huì)推薦使用的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件”計(jì)算了各樣本與對(duì)照指紋圖譜的相似度。同時(shí)本文還采用對(duì)照品、紫外光譜圖以及HPLC-MS定性方法對(duì)指紋圖譜中主要色譜峰進(jìn)行了歸屬研究，確定了主要色譜峰的可能化學(xué)結(jié)構(gòu)歸屬。 針對(duì)同一中藥樣本在不同實(shí)驗(yàn)室條件下所得的色譜指紋圖譜中色譜保

4、留時(shí)間易產(chǎn)生漂移的現(xiàn)象，本實(shí)驗(yàn)對(duì)大豆異黃酮指紋圖譜在不同色譜儀及不同色譜柱上保留時(shí)間的漂移進(jìn)行了校準(zhǔn)研究。首先選取5個(gè)極性適當(dāng)?shù)幕衔镒鳛闃?biāo)準(zhǔn)樣品，在不同儀器及不同色譜柱上用已建立的大豆異黃酮HPLC指紋圖譜條件進(jìn)行測(cè)定，對(duì)其保留時(shí)間進(jìn)行線性回歸，利用得到的常數(shù)a、b對(duì)不同儀器及不同色譜柱上測(cè)得的大豆異黃酮指紋譜中峰面積大于總峰面積1.5％的色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行校正，使不同儀器及不同色譜柱上得到的保留時(shí)間的最大絕對(duì)誤差由5.868min