生物法制備大豆異黃酮甙元的研究.pdf

1、大豆異黃酮的生理活性主要來自于大豆異黃酮甙元，而游離型的大豆異黃酮甙元只占大豆異黃酮總量的1％。因此如何能將大豆異黃酮葡萄糖甙水解成為甙元，特別是利用產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的微生物發(fā)酵水解大豆異黃酮葡萄糖甙成為近來大豆異黃酮研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。 本文研究了用HPLC測定兩種大豆異黃酮甙元一大豆黃素和染料木黃酮含量的色譜條件(以甲醇-0.5％乙酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫為35℃，檢測波長為260nm)，并檢測

2、了大豆和豆豉中兩種甙元的含量。結(jié)果表明：大豆經(jīng)發(fā)酵后，大豆異黃酮甙元含量明顯提高。 依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以豆豉為材料，選育高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株。先經(jīng)過篩選，得到一株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶酶活力較高的細(xì)菌。然后將該菌經(jīng)過UV、LiCl誘變，其酶活由0.26(OD值)提高到0.768(OD值)。對(duì)酶活力最高的誘變株(B.sp-7)的產(chǎn)酶條件優(yōu)化，利用京尼平甙法和水楊苷法分別測得其在最佳產(chǎn)酶條件下(黃豆粉1％、酵母膏1％、麩皮2％、KH<

3、,2>PO<,4>0.1％、NaCl0.5％、PH7.5、裝液量：30ml/300ml三角瓶、發(fā)酵時(shí)間：48h、發(fā)酵溫度：37℃、轉(zhuǎn)速：70r/min)的β-葡萄糖苷酶酶活力分別為0.826(OD值)和5.49μg/ml。 同時(shí)，以細(xì)菌B.sp-7最佳產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的條件為參考，優(yōu)化了其產(chǎn)大豆黃素和染料木黃酮的發(fā)酵工藝條件(大豆黃素：麩皮0.5％，酵母膏0.2％，大豆0.5％，NaCl0.04％，K<,2>HPO<,4>0.1

4、％，溫度40℃，轉(zhuǎn)速180r/min，裝液量45m1/300ml，發(fā)酵時(shí)間48h；染料木黃酮：牛肉膏2％，蛋白胨0.2％，大豆0.5％，CaCl<,2>0.04％，ZriSO<,4>0.02％，K<,2>HPO<,4>0.1％，溫度28℃，轉(zhuǎn)速70r/min，裝液量60ml/300ml，發(fā)酵時(shí)間48h)，通過HPLC檢測發(fā)現(xiàn)：大豆經(jīng)發(fā)酵后其大豆黃素和染料木黃酮的含量達(dá)到565.15 μg/g和1230.14μg/g，分別是未發(fā)酵大豆的5