大豆異黃酮對(duì)腦缺血大鼠保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的 本研究采用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型，觀察大豆異黃酮(Soybeanisoflavone，ISO)對(duì)腦缺血大鼠的保護(hù)作用，并探討其機(jī)制，為使用大豆異黃酮防治缺血性腦梗塞的發(fā)生發(fā)展、減輕癥狀提供科學(xué)依據(jù)。 方法 1.MCAO模型的建立：健康成年SpragueDawley(SD)大鼠20只，雌雄各半，隨機(jī)分成模型組和假手術(shù)組，模型組采用線栓法建立

2、大鼠左側(cè)MCAO模型，術(shù)后24h觀察體征，做神經(jīng)功能缺損評(píng)分，對(duì)腦組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。2.大豆異黃酮對(duì)腦缺血大鼠保護(hù)作用的研究：健康成年SD大鼠60只，隨機(jī)分成6組：ISO低劑量+MCAO組(ISO-L+MCAO，10mg/kgbw·d)、ISO中劑量組(ISO-M+MCAO，20mg/kgbw·d)、ISO高劑量組(ISO-H+MCAO，50mg/kgbw·d)、VE組(VE+MCAO，20mg/kgbw·d)、假手術(shù)組(ShamOP

3、)、模型組(Model)，ShamOP和Model組大鼠每天灌以生理鹽水5ml，實(shí)驗(yàn)期4周，除ShamOP組外其余各組均于第四周末做左側(cè)MCAO模型。使用Y迷宮檢測(cè)造模后大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，分別于造模后1h和6h核磁共振觀察缺血半暗帶，使用試劑盒檢測(cè)給藥前和造模后血清以及腦組織抗氧化指標(biāo)SOD和GSH-PX活性、MDA含量，半定量RT-PCR法檢測(cè)給藥前和造模后血淋巴細(xì)胞以及腦組織HO-1和HO-2mRNA表達(dá)水平，高效液相色譜法測(cè)定給藥

4、前和造模后血漿同型半胱氨酸(Hcy)濃度，透射電鏡進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，腦組織病理學(xué)檢查。 結(jié)果 1.大鼠MCAO模型的建立：ShamOP組大鼠全部存活，Model組除2只因麻醉過(guò)度死亡、1只插線未成功外，其余7只均出現(xiàn)左側(cè)Horner征，神經(jīng)功能缺損評(píng)分在1-3分之間，達(dá)到模型成功標(biāo)準(zhǔn)，模型組大鼠腦組織可見(jiàn)顯著病理改變。2.ISO對(duì)腦缺血大鼠保護(hù)作用的研究：(1)ISO對(duì)腦缺血大鼠的保護(hù)作用：與Model組相比ISO-M+M

5、CAO、ISO-H+MCAO組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、血清以及腦組織SOD和GSH-PX活性、血淋巴細(xì)胞以及腦組織HO-1和HO-2mRNA表達(dá)水平、6h各興趣區(qū)rADC、rDCavg、rFA值較高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；血清及腦組織MDA含量、血漿同型半胱氨酸濃度均較低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。ISO-L+MCAO與Model組相比，學(xué)習(xí)能力、血清及腦組織SOD活性、腦組織GSH-Px活性、血淋巴細(xì)胞HO

6、-1mRNA表達(dá)水平、腦組織HO-2mRNA表達(dá)水平、6h各興趣區(qū)rADC、rFA值均較高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；而血清及腦組織MDA含量、血清GSH-Px活性、血淋巴細(xì)胞HO-2mRNA表達(dá)水平、腦組織HO-1mRNA表達(dá)水平、血漿同型半胱氨酸濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)ISO對(duì)腦缺血大鼠的保護(hù)作用與VE作用的比較：ISO-L+MCAO、ISO-M+MCAO組與VE+MCAO組比較，血清及腦組織GSH-Px

7、活性、SOD活性較低，血清及腦組織MDA含量、血漿Hcy濃度較高，血淋巴細(xì)胞及腦組織HO-1和HO-2mRNA表達(dá)水平較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；ISO-H+MCAO組與VE+MCAO組比較血清及腦組織SOD、GSH-PX活性和MDA含量、血漿Hcy濃度、腦組織、血淋巴細(xì)胞HO-1、HO-2mRNA表達(dá)水平、6h各興趣區(qū)rADC、rDCavg、rFA值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(3)相關(guān)分析：ISO劑量與學(xué)習(xí)記憶能力

8、、血清及腦組織SOD和GSH-PX活性、血淋巴細(xì)胞和腦組織HO-1、HO-2mRNA表達(dá)水平、6h各興趣區(qū)rADC、rDCavg、rFA均呈正相關(guān)關(guān)系；而與血清及腦組織MDA含量、血漿同型半胱氨酸水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。(4)腦組織病理學(xué)檢查：Model組大鼠腦組織可見(jiàn)顯著病理改變，神經(jīng)細(xì)胞體積明顯縮小，胞漿及胞核固縮，胞突消失，部分細(xì)胞呈三角形，膠質(zhì)細(xì)胞亦固縮，神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞以及毛細(xì)血管、小血管與周圍腦間質(zhì)的間隙顯著增大，間質(zhì)疏松。與M

9、odel組相比ISO三個(gè)劑量組的大鼠腦組織病變均明顯改善，神經(jīng)細(xì)胞固縮減輕，細(xì)胞及血管與周圍腦間質(zhì)的間隙明顯變窄，間質(zhì)疏松亦輕于模型組。(5)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：Model組可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞核膜模糊不清晰，核質(zhì)電子密度降低，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稀少，短帶狀或小泡狀，核糖體大部分消失，線粒體少呈小顆粒狀，基質(zhì)暗，結(jié)構(gòu)不清。ISO-H+MCAO組可見(jiàn)神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)良好，胞核大，圓形或卵圓形，雙層核膜清晰可辨，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量多呈短帶狀，核糖體豐富，線粒體桿

10、狀、卵圓形或圓形。 結(jié)論 1.線栓法可用于建立大鼠MCAO模型，模型體征明顯，腦組織病理改變顯著，可達(dá)到模型成功標(biāo)準(zhǔn)。2.ISO可以提高腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、血清及腦組織SOD和GSH-PX活性、血淋巴細(xì)胞及腦組織HO-1和HO-2mRNA表達(dá)水平以及6h時(shí)各興趣區(qū)rADC、rDCavg、rFA值；降低血清及腦組織MDA含量、血漿同型半胱氨酸水平；減輕腦缺血大鼠腦組織的病理改變以及超微結(jié)構(gòu)改變。3.ISO可通過(guò)提高機(jī)體抗氧化