大豆異黃酮對大鼠腦缺血再灌后神經細胞凋亡的影響及機理探討.pdf

1、目的：1.觀察大豆異黃酮（soybean isoflavone,SI）對大鼠全腦缺血再灌注損傷后神經細胞凋亡的影響。2.探討SI對腦缺血再灌注損傷保護作用的機制。
　　方法：成年Sprague-Dawley大鼠60只，雄，隨機分為3組：假手術組（Sham group），缺血再灌組(IR group)，大豆異黃酮預處理組（SI group），每組20只。大豆異黃酮預處理組給予SI120 mg/kg連續(xù)灌胃三周，其他兩組用等體積的0.

2、9％生理鹽水連續(xù)灌胃三周，第22天進行手術。阻斷三血管建立全腦缺血再灌注損傷模型，假手術組不予缺血；另外兩組缺血1 h后再灌1 h，缺血再灌注過程中動態(tài)監(jiān)測腦電圖變化。光鏡下觀察各組腦皮層及海馬組織形態(tài)的病理變化,透射電鏡觀察各組海馬CA1區(qū)神經細胞超微結構的改變。流式細胞術測定神經細胞凋亡率。生化檢測皮層腦組織Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性。用RT-PCR法檢測皮層腦組織中bcl-2 mRNA、bax mR

3、NA表達。免疫組織化學法測定腦組織中Caspase-3的表達。
　　結果：1、光鏡下病理學改變：Sham組腦組織神經細胞數目基本正常，形態(tài)正常，胞體飽滿，胞漿淡染，核仁明顯。IR組腦組織損傷嚴重，腦組織正常結構消失，神經細胞及膠質細胞均腫脹，變性壞死，胞膜不清，胞核固縮，間質水腫明顯，細胞及血管周圍間隙增大。SI組病變輕微，多數細胞保存完好，神經細胞及間質細胞僅有輕微水腫，核仁清晰可見，胞膜完整。2、透射電鏡下病理學改變：Sham

4、組神經細胞雙層核膜清楚完整，染色質分布均勻，線粒體嵴清晰可見，粗面內質網無擴張。IR組神經細胞水腫，細胞核內染色質邊集、分布不均，雙層結構的核膜破壞，線粒體嵴消失、腫脹、空泡化，結構破壞，不完整，粗面內質網擴張明顯，核糖體數量明顯減少。SI組細胞輕度水腫，結構完整，少數線粒體腫脹，嵴突少許破壞，粗面內質網無明顯擴張。3、流式細胞術測定凋亡率：各組均收集10000個細胞，IR組細胞凋亡率明顯高于Sham組；SI組細胞凋亡率明顯低于IR組，

5、各組間差異顯著（P<0.05）。4、生化檢測結果顯示：IR組Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性明顯低于Sham組；SI組Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性顯著高于IR組，各組間差異顯著（P<0.05）。5、半定量RT-PCR檢測結果顯示：Sham組腦組織bcl-2 mRNA， bax mRNA表達較低；IR組bcl-2mRNA表達略增高、bax mRNA表達顯著高于Sham組，而bcl-2

6、/bax比值顯著低于Sham組；SI組bcl-2 mRNA表達高于IR組， bax mRNA表達較IR組相比明顯降低，而bcl-2/bax比值顯著高于IR組。各組間差異顯著（P<0.05）。6、免疫組化檢測結果顯示：Sham組僅見少量的胞漿淡染呈棕黃色Caspase-3陽性細胞表達；而IR組，Caspase-3陽性細胞表達呈強陽性且陽性細胞數目明顯增加；SI組Caspase-3陽性細胞的染色及數目明顯低于IR組。各組間差異顯著（P<0.

7、05）。
　　結論：1、大鼠全腦缺血再灌注損傷時Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性降低；促凋亡基因bax mRNA表達升高而抑凋亡基因bcl-2 mRNA降低；Caspase-3蛋白表達增高。
　　2、大豆異黃酮可減輕大鼠全腦缺血再灌注損傷而發(fā)揮神經保護作用
　　3、大豆異黃酮神經保護的機理可能有：
　　1）提高Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性,調節(jié)細胞內外的離子