大豆異黃酮對(duì)去勢(shì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討雌激素水平下降對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨的影響以及大豆異黃酮對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨退變的保護(hù)作用。 方法：采用3月齡雌性Wistar大鼠120只，按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)照組、己烯雌酚組、大豆異黃酮低、中、高劑量組，共6組，每組各20只。建立模型：采用切除大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立去勢(shì)大鼠動(dòng)物模型。給藥方法與劑量：灌胃，每日一次，連續(xù)16周；假手術(shù)組1ml蒸餾水，對(duì)照組1ml蒸餾水，己烯雌酚組0.86mg/kg·d，大豆異黃酮低劑

2、量組30mg/kg·d，中劑量組60mg/kg·d，高劑量組120mg/kg·d。處死時(shí)間、取材與測(cè)量指標(biāo)：分別于給藥后第4、8、12、16周時(shí)每組隨機(jī)取5只大鼠處死。處死前測(cè)量體重，股動(dòng)脈取血處死，血樣離心分離血清，采用放免法測(cè)量血清雌二醇(E2)水平；分離子宮，立即稱(chēng)取其濕重，計(jì)算子宮指數(shù)，子宮標(biāo)本固定、石蠟包埋制片，常規(guī)HE染色，用于組織形態(tài)學(xué)觀(guān)察；取完整膝關(guān)節(jié)(包括股骨段、脛骨段各0.8cm)，10％EDTA脫鈣后石蠟包埋制片分

3、別進(jìn)行HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、番紅O染色、雌激素β受體免疫組化染色，顯微鏡下觀(guān)察關(guān)節(jié)軟骨的形態(tài)學(xué)改變、采用病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)關(guān)節(jié)軟骨厚度、關(guān)節(jié)軟骨MOD值(平均光密度值，其數(shù)值大小可反映關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)中蛋白多糖含量和濃度的變化)及軟骨下骨厚度進(jìn)行測(cè)量。全部計(jì)量資料均以SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：1.對(duì)照組大鼠血清雌二醇水平和子宮指數(shù)均明顯低于假手術(shù)組(P＜0.01)；對(duì)照組軟骨厚度、MOD值和軟骨下骨厚度均低

4、于假手術(shù)組(P＜0.01)。2.大豆異黃酮低、中、高劑量組大鼠血清雌二醇水平、子宮指數(shù)均高于對(duì)照組(P＜0.01)，低于己烯雌酚組(P＜0.05，P＜0.01)。關(guān)節(jié)軟骨厚度的比較：在股骨關(guān)節(jié)軟骨，大豆異黃酮低、中、高組16周時(shí)的軟骨厚度為143.35±8.50μm、150.33±7.75μm、155.29±5.50μm，明顯高于對(duì)照組的118.24±11.95μm，與己烯雌酚組軟骨厚度147.95±8.57μm比較后均無(wú)顯著差異。在脛

5、骨關(guān)節(jié)軟骨，大豆異黃酮中劑量組8、12周時(shí)的軟骨厚度分別為334.50±21.30μm、355.54±23.57μm，對(duì)應(yīng)相同時(shí)間己烯雌酚組軟骨厚度分別為330.76±7.08μm、334.60±43.53μm，二者相比無(wú)顯著差異；而大豆異黃酮高劑量組軟骨厚度4周時(shí)為313.46±37.85μm，到16周時(shí)降為284.92±4.47μm明顯低于己烯雌酚組和大豆異黃酮低、中劑量組。關(guān)節(jié)軟骨MOD值的比較：在股骨關(guān)節(jié)軟骨，大豆異黃酮各劑量組

6、軟骨MOD值均高于對(duì)照組(P＜0.01)，其中大豆異黃酮高劑量組4、8、12、16周時(shí)的軟骨MOD值明顯高于己烯雌酚組(P＜0.01)，而大豆異黃酮低、中劑量組軟骨MOD值則低于己烯雌酚組(P＜0.01)。在脛骨關(guān)節(jié)軟骨，大豆異黃酮高劑量組4、8、12、16周時(shí)的軟骨MOD值均接近甚至高于己烯雌酚組，低、中劑量組軟骨MOD值雖然高于對(duì)照組(P＜0.01)但均低于高劑量組，且低、中劑量組之間無(wú)顯著差異。軟骨下骨厚度的比較：在股骨軟骨下骨，

7、大豆異黃酮高劑量組厚度最高時(shí)為40.8565±3.0166μm，而己烯雌酚組最高時(shí)僅為33.2098±4.7235μm，大豆異黃酮高劑量組厚度明顯高于己烯雌酚組(P＜0.05，P＜0.01)；大豆異黃酮低、中劑量組股骨軟骨下骨厚度明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，與己烯雌酚組相比無(wú)顯著差異。在脛骨軟骨下骨，大豆異黃酮高劑量組厚度最高時(shí)為37.4449±3.3226μm，己烯雌酚組最高時(shí)為38.5791±2.8778μm，兩組在4、8、12

8、、16周不同時(shí)間相比均無(wú)顯著差異，并且均高于大豆異黃酮低、中劑量組。免疫組化染色示大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞ERβ陽(yáng)性。 結(jié)論：1.進(jìn)一步證實(shí)OVX大鼠雌激素水平下降后可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生形態(tài)學(xué)退變并使軟骨基質(zhì)中的蛋白多糖含量減少，雌激素水平下降可能是絕經(jīng)后女性骨性關(guān)節(jié)炎的重要病因；2.OVX大鼠出現(xiàn)的關(guān)節(jié)軟骨退變可能是通過(guò)存在于軟骨細(xì)胞的雌激素受體實(shí)現(xiàn)的；3.外源性雌激素對(duì)OVX大鼠關(guān)節(jié)軟骨退變有一定的保護(hù)作用；4.大豆異黃酮在一定程度