在一個(gè)巴基斯坦近親結(jié)婚的家系中FANCM純合移碼突變導(dǎo)致男性不育的研究.pdf

1、精子發(fā)生包括原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells，PGCs)形成、遷移、增殖和分化，性原細(xì)胞增殖、靜息和遷移，精原（干）細(xì)胞自我更新和分化，精母細(xì)胞減數(shù)分裂和精細(xì)胞變態(tài)形成精子一系列連續(xù)過(guò)程。其中任何一步發(fā)生異常，都會(huì)導(dǎo)致精子畸形、運(yùn)動(dòng)能力下降或數(shù)目減少（如臨床上常見(jiàn)的畸、弱、少精子癥），乃至無(wú)法形成（即臨床上常見(jiàn)的無(wú)精子癥），從而引發(fā)男性不育。男性不育影響約7％的男性。遺傳因素可能是生精障礙的主要原因，但在大多數(shù)病

2、例中，其發(fā)病病因仍不清楚。
　　本論文對(duì)一個(gè)巴基斯坦近親結(jié)婚后代發(fā)生男性不育的家系進(jìn)行研究，以期揭示其不育的原因。父母為表兄妹結(jié)婚，生育四個(gè)兒子，其中三個(gè)不育，兩位為少弱精子癥患者，另一位是無(wú)精子癥患者。通過(guò)全外顯子組和Sanger測(cè)序，篩選到范可尼貧血(Fanconi Anemia,FA)核心復(fù)合物成分FANCM的一個(gè)移碼突變(c.1946_1958del，p.P648Lfs*16)與不育癥共分離，認(rèn)為是該家系不育患者的潛在致病

3、突變。因?yàn)镕ANCM參與DNA鏈間交聯(lián)（interstrand crosslink，ICL）損傷修復(fù)，所以我們檢測(cè)患者外周血淋巴細(xì)胞對(duì)MMC誘發(fā)染色體斷裂的敏感性。結(jié)果表明，相比于其父親，患者的淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)染色體斷裂增加，且斷裂頻率隨MMC濃度的增高而增多，提示該FANCM突變破壞其功能，并導(dǎo)致ICL損傷修復(fù)缺陷。
　　HEK293T細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí):該FANCM移碼突變可導(dǎo)致截短蛋白形成，使FANCM不能定位于ICL位點(diǎn)，進(jìn)而引起F

4、ANCD2不能被單泛素化、FA通路不能激活，最終導(dǎo)致ICL無(wú)法修復(fù)和細(xì)胞死亡。
　　我們制備了攜帶與患者幾乎一致的Fancm突變(Fancm△C/△C)小鼠，發(fā)現(xiàn)純合突變小鼠與患者表型類似，即:精子發(fā)生障礙、生育力大幅降低。具體表現(xiàn)為精子數(shù)目顯著減少、運(yùn)動(dòng)能力降低，各級(jí)生精細(xì)胞大量丟失和圓形精細(xì)胞停滯。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn):精原細(xì)胞對(duì)MMC敏感性增強(qiáng)、增殖受損和圓形精細(xì)胞DNA損傷修復(fù)缺陷，但減數(shù)分裂前期進(jìn)程未受影響。有趣的是，所有患者和F