一個血友病A家系的基因突變研究.pdf

1、目的：⑴探討長距離PCR、雙管多重PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR在血友病A基因診斷中的應(yīng)用。⑵探討該血友病A家系FⅧ基因的突變類型與患者表型的關(guān)系，以及突變致病的分子機制。⑶觀察該血友病A家系FⅧ基因的突變對該家系成員凝血功能及FⅧ活性的影響。
　　 方法：①在CA1500型血液凝固分析儀上測定先證者及其家系成員凝血酶凝血功能、FⅧ∶C及FⅧ抗體滴度；②根據(jù)操作說明書從先證者及其家系成員外周血白細胞中提取基因組DNA和RNA；③長距離PC

2、R和雙管多重PCR技術(shù)檢測該血友病家系FⅧ基因的內(nèi)含子22和1倒位突變;4.逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)合基因測序檢測FⅧ的其它類型突變。
　　 結(jié)果：⑴先證者及其胞弟、先證者外侄的APTT明顯延長，F(xiàn)Ⅷ∶C中到重度降低。攜帶者僅表現(xiàn)FⅧ∶C在正常低值，受檢的家系成員FⅧ抗體滴度均為零;⑵長距離PCR擴增和雙管多重PCR擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果提示該家系不存在內(nèi)含子22倒位和內(nèi)含子1倒位;⑶逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果顯示先證者及其胞弟、先證者外

3、侄FⅧ基因存在2404C→T改變。
　　 結(jié)論：①本實驗采用的長距離PCR技術(shù)、雙管多重PCR技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)以及基因測序用于檢測出HA的突變類型是可行的。②該HA家系的FⅧ基因14號外顯子2404 C→T突變導致FⅧ發(fā)生Gln783X突變，推測此突變導致該家系患者FⅧ蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進而降低FⅧ∶C，影響他們的凝血功能。③該HA家系的FⅧ基因14號外顯子2404 C→T突變?yōu)閲鴥?nèi)首次報道，本研究結(jié)果豐富了人類FⅧ基因突