血友病A基因缺陷與臨床表型關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　研究血友病 A患者的分子發(fā)病機制，以期在基因或表觀遺傳學(xué)層面找到新的基因缺陷類型或分子機制，從而進一步揭示其臨床表現(xiàn)異質(zhì)性的原因，為血友病A的治療尋找新的切入點。
　　方法：
　　隨機抽取重慶地區(qū)已確診血友病A患者24例，對所有病人通過當(dāng)面詢問、反復(fù)電話隨訪及病例資料回顧獲取臨床表型及實驗室資料，取其血樣用長距離PCR及雙管多重PCR分別進行內(nèi)含子1及內(nèi)含子22倒位檢測、高通量測序分析 FⅧ基因全外顯子突變

2、情況、質(zhì)譜甲基化檢測方式進行啟動子區(qū) CpG島甲基化情況分析（加入正常對照）。所有突變通過Pumbmed、UCSC、FactorⅧ Variant Database檢索明確是否為已報到突變或者是目前新發(fā)現(xiàn)突變，并結(jié)合倒位檢測結(jié)果分析患者病情；而所選病例的甲基化檢測結(jié)果則與正常對照組進行比較，尋找其表觀遺傳學(xué)修飾差異。
　　結(jié)果：
　　1．24例病人年齡分布在2歲到48歲，多以關(guān)節(jié)出血為主要表現(xiàn)，其中重型13例（54.1％）、

3、中間型9例（37.5%），中-重型1例（4.2%）（輸注新鮮冰凍血漿后測FⅧ：C為8.6%），輕型1例（4.2%）；所有病人臨床表現(xiàn)與嚴(yán)重程度分型基本符合。
　　2.因為標(biāo)本采集后部分血樣 DNA濃度不足，24例標(biāo)本共有18例進行了倒位檢測，其中有7例檢測出了22號內(nèi)含子倒位，約占檢測者中38.9%，未檢測出1號內(nèi)含子倒位患者。
　　3.24例病人中FⅧ基因外顯子測序有7例未檢測出突變。余17例病人共檢測出突變21個（15種

4、），與Pumbmed、UCSC、FactorⅧVariant Database進行對比后發(fā)現(xiàn)有10種突變?yōu)樾掳l(fā)現(xiàn)突變。
　　4.對照組與所選擇輕型及重型病例組對比，啟動子區(qū) CpG島甲基化程度在病例與對照之間或輕型及重型病例之間并無顯著差異。
　　結(jié)論：
　　血友病 A患者以關(guān)節(jié)出血為主要表現(xiàn)，臨床上重型較多見；其基因結(jié)構(gòu)龐大，造成FⅧ基因重大改變的如倒位、終止突變等多導(dǎo)致重型臨床表型，但其基因缺陷類型種類繁多，目前所