血友病A基因診斷及產(chǎn)前診斷技術(shù)的研究.pdf

1、背景:血友病A(Hemophilia A，HA)是最常見的X連鎖隱性遺傳性出血性疾病，其最主要病因是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷而導(dǎo)致FⅧ含量不足或活性下降，從而引起凝血功能障礙，多表現(xiàn)為自發(fā)性出血不止或手術(shù)、創(chuàng)傷后出血不止。臨床上根據(jù)患者凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C)將其分為重型、中性和輕型，比例分別為50％，10％，40％，其中重型HA中有約50％的是由于F8基因內(nèi)含子22倒位突變引起的。由于內(nèi)含子22倒位突變檢測(cè)難度大，一直是限

2、制HA基因診斷在臨床上廣泛開展的原因。本病尚無根治方法，只能以凝血因子Ⅷ相關(guān)制品替代治療，因此，有必要開展HA的基因診斷及產(chǎn)前診斷，對(duì)攜帶者進(jìn)行早期遺傳學(xué)控制，防止此類患兒的出生。
　　 目的:對(duì)來我院就診的13個(gè)HA家系先證者進(jìn)行F8基因突變分析，并對(duì)家系中女性成員進(jìn)行攜帶者檢測(cè)及高危胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。
　　 方法:應(yīng)用IS-PCR(inverse shifting-polymerase chain reaction)

3、對(duì)HA患者進(jìn)行F8基因倒位檢測(cè)，倒位檢測(cè)陰性患者應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA測(cè)序的方法進(jìn)行突變檢測(cè)，仍未見突變的患者應(yīng)用多重酶聯(lián)依賴探針擴(kuò)增(Multiplex ligation-dependent probeamplification，MLPA)進(jìn)行重復(fù)突變檢測(cè)。
　　 結(jié)果:IS-PCR檢測(cè)出6例HA患者存在F8基因內(nèi)含子22遠(yuǎn)端倒位突變;倒位檢測(cè)陰性患者直接測(cè)序檢出5例存在點(diǎn)突變，其中4例為未見報(bào)道的新突變，分別為:

4、c.4875_4876insA，c.6267delG，c.994delT，IVS20-1G＞A; MLPA檢測(cè)出1例患者存在exons2～22重復(fù)突變，為未見報(bào)道的新突變;1例患者未見F8基因突變。攜帶者檢測(cè)結(jié)果顯示18例女性中10例為該病攜帶者;5個(gè)HA家系中高危胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果顯示3例為女性攜帶者胎兒，1例為正常女性胎兒，1例為正常男性胎兒。
　　 結(jié)論:IS-PCR倒位檢測(cè)結(jié)合直接測(cè)序及MLPA可有效的對(duì)HA患者及攜帶者進(jìn)