胎兒血FⅧ：C結(jié)合基因檢測(cè)在甲型血友病產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：甲型血友病是由于凝血因子Ⅷ（coagulation factor Ⅷ，F(xiàn)8）的遺傳性缺陷或缺乏，以致凝血活酶生成障礙的出血性疾病。這是一種常見(jiàn)的X連鎖隱性遺傳性疾病，該病主要是女性傳遞，男性發(fā)病，多見(jiàn)隔代遺傳。甲型血友病主要是由于基因突變所致，而22內(nèi)含子倒位是F8基因上最為集中的一種突變，約占重型甲型血友病的40％-50％，所以FⅧ基因內(nèi)含子22的倒位分析可作為重型甲型血友病的首選試驗(yàn)，也是目前用于臨床診斷的直接基因檢測(cè)方法。甲

2、型血友病胎兒凝血因子Ⅷ合成障礙，胎兒臍帶血凝血因子Ⅷ明顯低于正常，對(duì)高危胎兒進(jìn)行臍血因子Ⅷ檢測(cè)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的可靠性尚需進(jìn)一步評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)主要是探討應(yīng)用胎兒臍靜脈血FⅧ：C檢測(cè)結(jié)合基因診斷對(duì)甲型血友病高危胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷的臨床可行性。 研究方法： 1. 研究對(duì)象選取自1996年10月到2008年10月在山東省立醫(yī)院行產(chǎn)前診斷的79例孕20-35周間的甲型血友病高危孕婦為研究對(duì)象。 2. 實(shí)驗(yàn)方法: 2．1

3、樣本采集對(duì)于79例20-35周間的甲型血友病高危孕婦，行B超檢查核實(shí)胎齡并確定胎兒為男嬰，經(jīng)腹B超引導(dǎo)下行胎兒臍靜脈穿刺取血術(shù)。取胎兒臍靜脈血3 mL，離心后血漿送山東省血液中心，高危孕婦外周血5 mL加入相應(yīng)劑量EDTA抗凝，離心后血漿同時(shí)送檢。離心后的胎兒及孕婦血細(xì)胞-20℃短期凍存?zhèn)溆谩?2．2 實(shí)驗(yàn)方法分別應(yīng)用一期法和ELISA法測(cè)定FⅧ：C及vWF：Ag，對(duì)于近1年來(lái)FⅧ：C<10％的胎兒血（n=6）采用LD-PCR檢

4、測(cè)內(nèi)含子22倒位，對(duì)于倒位陽(yáng)性的胎兒母親應(yīng)用LD-PCR檢測(cè)倒位攜帶者；對(duì)于非倒位胎兒及其母親應(yīng)用直接基因測(cè)序方法檢測(cè)基因突變位點(diǎn)。 結(jié)果：79例孕婦血FⅧ：C％為52-139％，平均（99．60±28．10）％。胎兒血FⅧ：C％<10％者23例，平均（2．64±1．92）％，均引產(chǎn)；其中8例胎兒血FⅧ：C<1％（重型血友病胎兒），15例胎兒血FⅧ：C>1％（輕中型血友病胎兒）。胎兒血FⅧ：C 10％-30％者12例，平均（19

5、．78±6．71）％，5例引產(chǎn)，7例繼續(xù)妊娠。有44例FⅧ：C>30％，平均（58．60±12．12）％，繼續(xù)妊娠，所有51例未引產(chǎn)者生后隨訪至今尚未發(fā)現(xiàn)異常。所有孕婦及胎兒血vWF均在正常范圍內(nèi)。行基因診斷的6例胎兒血FⅧ：C<10％，3例FⅧ：C>1％，3例FⅧ：C<1％。 送檢混有少量羊水的2ml臍帶血及沒(méi)有混有羊水的2ml臍帶血檢測(cè)FⅧ：C，結(jié)果顯示在臍帶血穿刺術(shù)操作過(guò)程中混入極少量羊水對(duì)結(jié)果無(wú)影響。 結(jié)論：應(yīng)用

6、胎兒血FⅧ：C及vWF：Ag濃度測(cè)定可以對(duì)甲型血友病高危孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，結(jié)合LD-PCR技術(shù)可準(zhǔn)確的對(duì)甲型血友病內(nèi)含子22倒位者進(jìn)行產(chǎn)前診斷及攜帶者的診斷，但基因測(cè)序檢測(cè)突變位點(diǎn)仍需要進(jìn)一步開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究。 意義：胎兒血FⅧ：C檢測(cè)進(jìn)行產(chǎn)前診斷可以防止甲型血友病患兒的出生， FⅧ基因突變的檢測(cè)可以進(jìn)一步確定FⅧ：C血清學(xué)檢查的準(zhǔn)確性，診斷出攜帶者，對(duì)于甲型血友病家系的遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷，減少不必要的侵入性產(chǎn)前診斷，減輕血友病家