一個(gè)Fabry病家系的GLA基因突變研究.pdf

1、目的:分析一個(gè)臨床診斷為Fabry病的家系成員及其對(duì)照的GLA基因突變位點(diǎn)和突變類(lèi)型,并對(duì)突變基因進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能預(yù)測(cè),初步闡明此突變所致Fabry病的可能機(jī)制,為Fabry病的診斷、治療和遺傳咨詢(xún)提供一定理論依據(jù)。
　　方法:通過(guò)調(diào)查問(wèn)卷詳細(xì)記錄此Fabry病家系成員的臨床資料,包括發(fā)病年齡,發(fā)病癥狀,既往病史,家族史,生活質(zhì)量等。對(duì)先證者父女二人及部分家系成員進(jìn)行腦CT、心臟彩超、心電圖、肝腎功能、腹部B超、血常規(guī)、尿常規(guī)、

2、眼部以及一般體格檢查,并用干血片法測(cè)定α-半乳糖苷酶A(α-galA)的活性。采集家系成員及正常對(duì)照外周靜脈抗凝血,擴(kuò)增GLA基因的7個(gè)外顯子及其鄰近區(qū)域,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化測(cè)序。用Chromas、clustalx、SeqMan等軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì),確定突變位點(diǎn)。通過(guò)HGMD和NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,明確該突變是已知突變或己知SNP或是未見(jiàn)報(bào)道的新突變。如果為新的突變,在NCBIHomogene網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,明確發(fā)生改變的氨基酸在不

3、同物種的GLA基因中的保守性,推測(cè)該突變的發(fā)生對(duì)蛋白質(zhì)造成的可能影響。運(yùn)用DNAStar及SWISS-MODEL網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器,對(duì)突變后的GLA基因進(jìn)行蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè),初步闡明此Fabry病家系可能的發(fā)病機(jī)制,并進(jìn)一步探討基因型與表現(xiàn)型的關(guān)系。
　　結(jié)果:該Fabry病家系共有成員26人,13人存在相關(guān)臨床癥狀,3名男性,10名女性。其中3名男性患者發(fā)病較早且較嚴(yán)重。女性患者中僅有兩名患者發(fā)病較重,一名表現(xiàn)為腎臟受累,另

4、一名表現(xiàn)為嚴(yán)重肢端疼痛,其余8名女性患者癥狀相對(duì)較輕;對(duì)該Fabry病家系的臨床資料分析表明該家系臨床表型為經(jīng)典型。對(duì)其GLA基因7個(gè)外顯子及其鄰近區(qū)域測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)該家系共有一個(gè)基因突變,位于第5外顯子,突變類(lèi)型為c.717_718delAA。對(duì)該突變基因編碼的蛋白質(zhì)二級(jí)及三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該突變基因編碼為提前終止的截短蛋白,結(jié)構(gòu)功能變化較大,因此c.717_718delAA為該家系的致病突變。在對(duì)照人群中發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)GLA基因突變,一個(gè)為

5、位于第三內(nèi)含子的小片段缺失g.7188_7192delCAGCC,另一個(gè)為位于第一外顯子的錯(cuò)義突變G11A,其中G11A為新突變,可能影響α-GalA蛋白質(zhì)的運(yùn)輸和加工,此兩種突變是否為致病突變還有待研究。
　　結(jié)論:基因突變c.717_718delAA對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能影響較大,這與該家系成員的經(jīng)典型臨床表現(xiàn)相一致,為該Fabry病家系的致病突變;Fabry病家系女性患者臨床癥狀各不相同,酶活性測(cè)定具有診斷局限,基因檢測(cè)為確診F