母系遺傳糖尿病家系線粒體基因突變的研究.pdf

1、目的：線粒體基因突變糖尿病(mitochondrialdiabetesmellitus，MDM)是一種單基因致病突變母系遺傳疾病，屬于特殊類型糖尿病，其發(fā)病原因為β細胞功能缺陷，最早發(fā)現(xiàn)且研究較多的突變類型是線粒體tRNA亮氨酸基因中的3243位點A到G的轉換，其影響胰島B細胞氧化磷酸化，抑制胰島素分泌。線粒體基因缺陷賦予了個體一定的糖尿病遺傳易感性。本試驗旨在對符合母系遺傳等條件的糖尿病家系成員，在選定段基因(np3069-3842)

2、區(qū)域對已知3個常見突變位點(np3243、3316、3394)進行篩查，觀察突變與糖尿病之間的關系，指導糖尿病的正確分類，對線粒體糖尿病早期診斷和積極預防。 方法：選擇14個糖尿病家系(42例)及無糖尿病家族史的散發(fā)糖尿病患者(43例)，受試者測量身高、體重、腰圍、臀圍、血糖、胰島素，抽取外周血3ml，2％EDTA抗凝，用改良酚氯仿法提取白細胞總DNA，用聚合酶鏈反應(PCR)方法對全部受試者的線粒體DNA的3069-3842區(qū)

3、域基因擴增，對PCR產(chǎn)物進行限制性片斷長度多態(tài)性(RFLP)檢測，將酶切后電泳條帶不同于野生型的PCR產(chǎn)物進行測序，確定突變位點。 結果：1、線粒體基因突變PCR產(chǎn)物的RFLP分析PCR產(chǎn)物為774bp，無突變者酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、169bp、97bp、79bp、15bp。3243A→G突變多出3245位點，酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、97bp兩條、79bp、72bp。3316G→A突變沒有3317位點，酶切

4、產(chǎn)物為266bp、233bp、180bp、79bp、15bp。3394T→C突變，多出3393酶切位點，酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、169bp、79bp、76bp、21bp、15bp。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)1號家系，先證者的丈夫攜帶有63316A突變，7號家系先證者的妻子和女兒攜帶有T3394C突變，他們均為健康攜帶者，空腹及餐后血糖、胰島功能均正常。散發(fā)對照組未發(fā)現(xiàn)突變。2、DNA序列分析采用blast軟件進行序列比對，結果表明所擴增片段的

5、序列為線粒體3069-3842之間的序列，對PCR-RFLP檢測呈陽性的標本和部分陰性標本進行DNA序列測定，分別證實G3316A突變和T3394C突變，DNA的測序結果與PCR-RFLP分析結果一致。 結論：1、母系遺傳糖尿病線粒體轉移核糖核酸亮氨酸t(yī)RNALeu(UURA3243G點突變發(fā)生率較低；2、線粒體np3394T→C突變及np3316G→A突變可見于無糖耐量異常的人群中；3、遺傳表型疑似線粒體糖尿病的患者與PCR-