視網(wǎng)膜母細胞瘤家系的基因突變檢測和遺傳咨詢.pdf

1、背景：視網(wǎng)膜母細胞瘤(Retinoblastoma，RB)是嬰幼兒最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤。其致病基因RB1位于染色體13q14，是人類發(fā)現(xiàn)的第一個抑癌基因。遺傳性RB與非遺傳性RB在臨床表現(xiàn)、突變特征和處理方面各不相同。分子遺傳學(xué)研究能夠更早發(fā)現(xiàn)并明確RB風險，從而為進一步診斷和治療提供依據(jù)，最終實現(xiàn)改善預(yù)后的目的，因此具有重要意義。RB1基因突變譜極為廣泛，給檢測帶來困難，但分子生物學(xué)的發(fā)展已經(jīng)提供了許多有效工具，聯(lián)合應(yīng)用能夠獲得良好的

2、檢出率。 目的：收集視網(wǎng)膜母細胞瘤患者(家系)，完成基因診斷，了解突變攜帶狀態(tài)，并將結(jié)果應(yīng)用于遺傳咨詢；豐富RB突變譜。 方法：提取患者外周血和腫瘤組織(如果有)的基因組DNA，設(shè)計引物擴增RB1基因各外顯子及其側(cè)翼序列和啟動子，直接測序與參考序列比對，以檢測堿基更替、小片段缺失/插入等小突變。 結(jié)果：在1例遺傳性RB家系外周血中檢出生殖細胞突變g.39470 G>T，產(chǎn)生終止密碼子，先證者腫瘤組織中檢出體細胞突

3、變g.2078 ins C，證實腫瘤發(fā)生的“two hit”模型。在1例散發(fā)雙側(cè)RB患者外周血中檢出生殖細胞突變g.45844 G>A，產(chǎn)生終止密碼子。其中g(shù).39470 G>T和g.45844 G>A均為首次報告。另外在2例散發(fā)單側(cè)RB患者中未檢出生殖細胞突變，對其中1例腫瘤組織的序列分析顯示可能存在雜合性缺失現(xiàn)象。 結(jié)論：直接測序法應(yīng)用于視網(wǎng)膜母細胞瘤的基因診斷是可行的，利用較低成本即可檢出大部分突變，陰性者可繼續(xù)選擇其他手