視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因檢測及其與臨床表型相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma,RB)作為兒童遺傳性腫瘤綜合征（Hereditary cancer syndromes）的最常見類型，其臨床管理與分子診斷結(jié)果有著重要的相關(guān)性。本研究目的在于篩查兒童視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者RB1基因突變，建立完善的RB1基因檢測方法，并探討RB1基因突變類型與臨床表型的相關(guān)性，為在國內(nèi)建立規(guī)范、健全的RB臨床管理模式打下基礎(chǔ)，并為其他遺傳性腫瘤綜合征的臨床管理及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究拓寬思路。

2、>　　方法：收集85例在復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院及復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院確診的RB患兒外周靜脈血標(biāo)本，包括39例散發(fā)雙眼及46例散發(fā)單眼患兒。提取基因組DNA，聯(lián)合應(yīng)用Sanger測序技術(shù)及多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(multiplexligation-dependent probe amplification，MLPA)檢測RB1基因27個外顯子及其附近100bp內(nèi)含子的變異以及雜合缺失(loss of heterozygosity, LO

3、H)情況。對于檢測結(jié)果有異常的患兒盡量收集家系標(biāo)本進(jìn)行檢測，同時收集患兒臨床病例資料進(jìn)一步分析。
　　結(jié)果：1、基因檢測一般情況85例RB患兒中，檢測出RB1基因突變患兒40例(47.1％)，包括36例雙眼患兒，4例單眼患兒。雙眼病例突變檢測率為92.3％(36/39)，單眼為8.7％(4/46)。40例RB1基因突變患兒中，77.5％(31/40)患兒檢測為無效突變(null mutations)，22.5％(9/40)檢測為框

4、內(nèi)突變(in-framemutations)。其中，3例患兒檢出相同的無義突變c.1735C＞T，5例患兒檢出相同的RB1基因全長雜合缺失。故共發(fā)現(xiàn)34個不同類型RB1基因突變，20％(8/40)由MPLA方法檢測。34個RB1基因突變中7個為未報道過的新突變。此外，共收集患兒一級親屬標(biāo)本24例，發(fā)現(xiàn)2例突變攜帶者，均為錯義突變。
　　2、突變與臨床資料分析存在RB1基因無效突變的患兒平均診斷年齡為10.7月齡，而框內(nèi)突變的患兒平

5、均診斷年齡為13.5月齡。無效突變患兒中雙眼占96.8％(30/31)，而框內(nèi)突變患兒中雙眼占66.7％(6/9)?；蛲蛔冾愋团c年齡、單/雙側(cè)的分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。但基因突變與臨床診斷時的腫瘤分期分析發(fā)現(xiàn)兩組并無差異。
　　結(jié)論：聯(lián)合應(yīng)用Sanger測序法及MLPA技術(shù)是RB1基因突變篩查的有效方法，兩者具有互補(bǔ)作用。RB1基因型與表型具有相關(guān)性，基因突變類型與腫瘤發(fā)病年齡及單/雙眼有關(guān)，與腫瘤初診時分期無關(guān)。無效突變傾向