視網(wǎng)膜色素變性患者視網(wǎng)膜色素變性1基因突變的檢測(cè)分析.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜色素變性（retinitis pigmentosa,RP）是一組常見的單基因遺傳性、致盲性眼病，目前尚無(wú)有效的治療方法。目前，通過(guò)連鎖分析和候選基因篩查，已發(fā)現(xiàn)63個(gè)基因與RP有關(guān)。RP1基因突變占ADRP致病突變的2％～7％，僅次于RHO和RDS。本研究的目的是研究RP1基因在寧夏地區(qū)RP患者中的突變頻率及特征，進(jìn)一步探討其在RP發(fā)病機(jī)制中的潛在作用。
　　方法：按國(guó)際通用的RP診斷標(biāo)準(zhǔn)收集寧夏回族自治區(qū)110例RP

2、患者，其中包含35例常染色體顯性遺傳性RP（ADRP）患者和75例散發(fā)患者（SRP）為RP患者組，同時(shí)收集100例正常對(duì)照者為正常對(duì)照組，抽取外周靜脈血3～5ml，EDTA抗凝，采用DNA提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司）提取全基因組DNA。按基因庫(kù)的RP1基因序列資料（GeneBank登錄號(hào)：NG_009840），參照Payne等報(bào)道的方法對(duì)RP1基因進(jìn)行PCR引物設(shè)計(jì)，在設(shè)計(jì)引物時(shí)使其擴(kuò)增區(qū)域覆蓋RP1基因的4個(gè)外顯子及其附近拼

3、接位點(diǎn)中的內(nèi)含子，共設(shè)計(jì)、合成21對(duì)引物。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）和直接測(cè)序法進(jìn)行RP1基因全編碼區(qū)和鄰近剪切位點(diǎn)的內(nèi)含子區(qū)域序列突變的檢測(cè)。運(yùn)用多因素分析和基于網(wǎng)絡(luò)的評(píng)分軟件PolyPhen、Sorting Intolerant From Tolerant（SIFT）對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：RP患者組和正常對(duì)照組RP1基因共檢測(cè)出11個(gè)變異位點(diǎn)，其中錯(cuò)義突變6個(gè)：p

4、.Gly706Arg、p.Arg872His、p.Asn985Tyr、p.Ala1670Thr、p.Ser1691Pro、p.Cys2033Tyr，同義突變3個(gè)：p.Gln1008Gln、p.Lys1152Lys、p.Gln1725Gln，非編碼區(qū)域突變2個(gè)：c.788-92T>C、c.*247A>C。p.Lys1152Lys和c.*247A>C為新發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)。RP患者組第3內(nèi)含子 c.788-92T>C的突變頻率與正常對(duì)照組相比差

5、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.12,P<0.01）；3’-側(cè)翼序列區(qū) c.*247A>C的突變頻率高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.77, P<0.01），且與RP發(fā)生呈顯著正相關(guān)（r=1.11, P<0.05）。在110例RP患者中，發(fā)現(xiàn)83例患者均同時(shí)攜帶p.Arg872His、p.Ala1670Thr和p.Ser1691Pro三個(gè)錯(cuò)義突變。在正常對(duì)照組中有22例出現(xiàn)p.Arg872His的突變，另有36例同時(shí)出現(xiàn)p.Ala

6、1670Thr和p.Ser1691Pro突變。三個(gè)錯(cuò)義突變?cè)?RP患者中的發(fā)生率均顯著高于正常對(duì)照組（χ2=59.87,χ2=33.21; P<0.01）。PolyPhen分析顯示，p.Arg872His、p.Ala1670Thr、p.Ser1691Pro均為保護(hù)性突變。SIFT分析顯示，這3個(gè)突變對(duì)RP均表現(xiàn)為保護(hù)作用。對(duì)患者的臨床表現(xiàn)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)攜帶上述3個(gè)突變的PR患者平均年齡為43.54±12.32歲，夜盲出現(xiàn)的平均年齡為30

7、.54±13.68歲，最佳矯正視力平均為0.50±0.38；未攜帶上述3個(gè)突變的PR患者平均年齡為34.87±17.60歲，夜盲出現(xiàn)的平均年齡為21.06±16.24歲，最佳矯正視力平均為0.40±0.33；2組患者夜盲出現(xiàn)的平均年齡、最佳矯正視力比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.01, t=2.11;P<0.05）。
　　結(jié)論：在寧夏回族自治區(qū)RP患者中，RP1基因的致病突變率低于中國(guó)其他地區(qū)的人群。研究發(fā)現(xiàn)非編碼區(qū)域堿基改變 c.