視網(wǎng)膜色素變性患者視錐桿細胞同源盒基因突變的研究.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜色素變性（RP）是最常見的遺傳性、致盲性眼底病。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少63個基因與其有關。我國已經(jīng)對20個RP相關基因進行了研究，但沒有任何一個基因能夠單獨解釋超過5％的RP發(fā)病原因。本次研究的目的是研究視錐-桿細胞同源盒（cone-rod homebox gene,CRX）基因在寧夏地區(qū)RP患者中的突變頻率及特征，并探討其在RP發(fā)病機制中的作用。
　　方法：按國際通用的視網(wǎng)膜色素變性診斷標準對所收集到的100例視網(wǎng)膜色素變

2、性患者（包括18例ADRP患者，15例ARRP患者，67例SRP患者），抽取外周靜脈血3～5ml， EDTA抗凝，采用北京天根基因公司生產(chǎn)的試劑盒抽提紅細胞DNA，按已發(fā)表的CRX基因序列資料，參照Dryja等報道的方法進行PCR引物設計，在設計引物時使其擴增區(qū)域覆蓋CRX基因的4個外顯子及其附近拼接位點中的內(nèi)含子，共設計合成了4對引物。聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction, PCR）擴增CRX基因第1～4外

3、顯子基因片段，反應結束后將其產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠（1.5％）電泳，證實 PCR擴增的目的片段（大小在253bp～665bp之間）。將所有的PCR產(chǎn)物進行DNA測序并進行序列分析；并隨機收集100例正常人進行對照檢測。采用Polyphen分析突變導致的氨基酸改變對CRX蛋白結構和功能的影響，運用多因素分析研究CRX基因突變位點對RP的作用。
　　結果：在100例RP患者的CRX基因上共檢測出了5個變異位點，2個為同義突變（p.Leu7

4、8 Leu，p.Ala92Ala），3個為錯義突變（p.Ala112Val，p.Gly122Asp and p.Thr187Ile）,其中p.Leu78 Leu，p.Ala92Ala和p.Thr187Ile為新發(fā)現(xiàn)的突變。其余突變位點均證實為CRX基因的多態(tài)性。p.Thr187Ile突變位點僅在2例ARRP患者身上檢出，在正常對照組未發(fā)現(xiàn)該位點突變。對此位點進行PSIC預測，為非致病性突變，多因素Logistic回歸進一步分析p.Thr