一個(gè)彌漫性掌跖角化病家系KRT1基因突變檢測及突變體功能分析.pdf

1、彌漫性掌跖角化病是一組手掌和足趾發(fā)生過度角化的常染色體顯性遺傳病，現(xiàn)有研究認(rèn)為該疾病與三個(gè)基因相關(guān)：定位在12q13的角蛋白KRTI基因和KRT16基因以及定位在17q12-q21的KRT9基因。角蛋白是表皮內(nèi)最主要的結(jié)構(gòu)蛋白。并且在維持角質(zhì)細(xì)胞形態(tài)中起到重要作用，該基因缺陷會(huì)導(dǎo)致遺傳性皮膚病。我們在本室收集的一個(gè)常染色體顯性彌漫性掌跖角化病家系中檢測到KRTI基因的突變IA37P，并對(duì)其突變后導(dǎo)致的功能變化進(jìn)行了初步研究。 第

2、一章對(duì)一個(gè)常染色體顯性彌漫性掌跖角化病家系的候選致病基因進(jìn)行突變檢測 現(xiàn)有研究表明，常染色體顯性彌漫性掌跖角化病由KRTI基因、KRTl6基因和KRT9基因的突變所致。我們對(duì)本室收集的一個(gè)常染色體顯性彌漫性掌跖角化病家系進(jìn)行上述三個(gè)侯選基因的突變檢測，通過PCR和直接測序，在KRTl基因中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)錯(cuò)義突變T1310C，導(dǎo)致第437位亮氨酸突變?yōu)楦彼酙A37P，該突變與疾病表型共分離，在60個(gè)家系外的正常對(duì)照中未發(fā)現(xiàn)該變異。因

3、此，我們推測KRTl基因的L437P突變可能是導(dǎo)致該家系發(fā)生彌漫性掌跖角化病的原因。 第二章 KRTl基因突變體的構(gòu)建和表達(dá)分析 為了探明我們發(fā)現(xiàn)的KRTl基因L437P突變與疾病的關(guān)系，我們從皮膚cDNA文庫中擴(kuò)增出KRTl野生型cDNA序列，并采用overlap法擴(kuò)增出T1310C突變的cDNA序列，分別克隆至pEGFP-N1質(zhì)粒構(gòu)成重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染HaCat細(xì)胞后用激光共聚焦顯微鏡觀察融合蛋白的綠色熒光表達(dá)，野生型的