一個(gè)中國缺觸酶血癥家系的臨床及基因突變研究.pdf

1、近年來的研究顯示，基因多態(tài)性、基因結(jié)構(gòu)缺陷在牙周病的發(fā)生中可能發(fā)揮重要的作用?；蛲蛔兪顾拗鳟a(chǎn)生易感性，再與環(huán)境因素相互作用，最終導(dǎo)致牙周病發(fā)生。通過對引起牙周病的遺傳性疾病及與牙周病的發(fā)生相關(guān)的基因多態(tài)性的研究發(fā)現(xiàn)，牙周病易感性相關(guān)基因并不局限于某單一染色體上，可能包括多個(gè)基因，每個(gè)易感性相關(guān)基因?qū)τ诩膊〉陌l(fā)生可能只有微弱的作用，牙周病的發(fā)生可能是多種遺傳因素和環(huán)境因子相互作用的結(jié)果。通常認(rèn)為這些因素達(dá)到一定的閾值時(shí)才會(huì)發(fā)病。因此，盡

2、管多基因疾病呈現(xiàn)一定的家族聚集型，但是它們并不以典型的孟德爾遺傳方式遺傳。 罕有疾病相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)對于牙周病易感基因的研究具有重要意義。缺觸酶血癥(Acatalasemia，ACAT)，是一種罕見的常染色體隱性遺傳病，由于CAT基因突變引起的，可伴有嚴(yán)重的進(jìn)行性壞死性齦炎，牙槽骨壞死等牙周組織破壞表現(xiàn)。先天性紅細(xì)胞生成性卟啉癥可能與牙周組織的發(fā)生相關(guān)，而血紅素是過氧化氫酶的輔基，因此，CAT成為牙周病研究的一個(gè)新興的候選基因，C

3、AT基因突變與牙周病的發(fā)生可能具有重要聯(lián)系。 目的 目前常染色體隱性遺傳缺觸酶血癥國外已有報(bào)道，而我國尚無此病例報(bào)道。我們發(fā)現(xiàn)并確診了一個(gè)中國缺觸酶血癥病例。本研究的目的是研究中國ACAT患者的臨床表型特點(diǎn)，并檢測其CAT基因突變位點(diǎn)和突變類型。 方法 1．細(xì)致地評價(jià)患病成員的癥狀學(xué)及相關(guān)臨床檢查，以求獲得該中國家系的臨床表型全貌。本病特點(diǎn)為紅細(xì)胞的CAT活性降低，純合子約為正常人的0.2-4％，雜合子約

4、為正常人的50％，其他富含CAT組織(如肝、脾等)的CAT含量正?；蚪档?。典型的口腔表征為，進(jìn)展性壞死性口炎，牙齦和牙槽骨進(jìn)行性壞死，牙齒過早脫落等。 2．檢索國外的研究進(jìn)展，選取候選基因(CAT)，采用熱啟動(dòng)+Touch downPCR．程序優(yōu)化PCR方法，擴(kuò)增CAT編碼序列以及外顯子、內(nèi)含子交界處及側(cè)翼序列。 3．中國ACAT患者的CAT基因突變檢測：利用優(yōu)化的擴(kuò)增CAT基因片段的PCR反應(yīng)條件，對ACAT患者及其家

5、系成員的CAT基因的CAT編碼序列以及外顯子、內(nèi)含子交界處及側(cè)翼序列，經(jīng)電泳檢測PCR產(chǎn)物，回收并純化產(chǎn)物后直接測序，與Genebank的CAT序列和正常人的序列比較，經(jīng)進(jìn)行突變篩查研究。 結(jié)果 1．該家系的臨床表型有如下特點(diǎn)：1、二代中有1人患病，Ⅰ代0人，Ⅱ代1人，提示此家系可能為常染色體隱性遺傳；2、患者的起病年齡為7歲；3、患者有進(jìn)展性壞死性牙齦炎和牙槽骨壞死病史；4、患者有反復(fù)發(fā)作的面部軟組織感染史，對積極的抗

6、感染治療效果較好；5、患者紅細(xì)胞的過氧化氫酶活性為5.2MU/L(4.6％)(紫外分光光度計(jì)法，正常人為113.3±16.5 Mu/L)，患者母親紅細(xì)胞的過氧化氫酶活性為92.8 MU/L(82.1％)，患者父親紅細(xì)胞的過氧化氫酶活性為86.2MU/L(76.3％)。臨床診斷為缺觸酶血癥。積極抗感染治療+定期牙周維護(hù)，取得了較好的治療效果。 2．利用熱啟動(dòng)+Touch down PCR程序成功擴(kuò)增CAT基因的CAT編碼序列以及外

7、顯子、內(nèi)含子交界處及側(cè)翼序列，以便于下一步進(jìn)行序列分析檢測突變。 3．中國ACAT患者的CAT基因突變檢測：利用優(yōu)化的擴(kuò)增CAT基因片段的PCR反應(yīng)條件，對ACAT患者及其家系成員的CAT基因的CAT編碼序列以及外顯子、內(nèi)含子交界處及側(cè)翼序列，并進(jìn)行序列分析檢測有無突變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了1個(gè)致病突變位點(diǎn)。該致病突變與已發(fā)現(xiàn)的ACAT日本A型相同，為intron4第5位堿基發(fā)生G→A突變，是剪切位點(diǎn)突變，可引起CAT?；钚越档?。未發(fā)現(xiàn)新

8、的責(zé)任基因。 4．另外，CAT基因突變與體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)相關(guān)，ACAT表型變異范圍較大，結(jié)合文獻(xiàn)探討了CAT基因突變與臨床疾病的關(guān)系，探討了進(jìn)一步的研究方向。 結(jié)論 1．中國的缺觸酶血癥病例伴有明顯的牙周組織破壞。本研究的中國ACAT患者的基因突變類型為CAT基因第4內(nèi)含子的第5位堿基發(fā)生了G→A突變，與日本A型相同。CAT基因第4內(nèi)含子的第5位堿基可能是牙周病的易感基因位點(diǎn)。 2．CAT基因是一個(gè)重要