一個中國先天性后極性白內障家系致病基因篩查及致病機制的研究.pdf

1、目的:
　　篩查一個中國五代先天性白內障家系的致病基因，并進一步研究可能的致病機制。
　　方法:
　　根據白內障表型，對候選致病基因編碼區(qū)及側翼序列直接測序。篩查到到突變位點通過限制性片段長度多態(tài)性分析驗證。將帶有FLAG標簽的野生型(WT)和突變型（Y219*）AQP0載體分別轉染到HEK293T細胞中，用相對定量PCR和Western blot檢測蛋白表達水平，用免疫熒光檢測蛋白的亞細胞定位。將FLAG-WT-AQ

2、P0與Myc-Y219*-AQP0共轉染到HEK293T細胞中，用免疫熒光研究野生和突變型蛋白的共定位。
　　結果:
　　我們篩查到MIP基因（主要內源性膜蛋白基因）上一個新的無意突變位點(c.657 C＞G; p.Y219*)。在該家系中表型與基因型共分離。該突變使原來AQP0蛋白219位賴氨酸轉變?yōu)榻K止密碼子(Y219*)。當FLAG-WT-AQP0與FLAG-Y219*-AQP0分別單獨轉染HEK293T細胞時，野生型

3、與突變型mRNA水平無明顯差異，但Y219*-AQP0蛋白水平較野生型AQP0蛋白水平明顯下降。免疫熒光顯示野生型AQP0蛋白主要定位在細胞膜上，而Y219*-AQP0蛋白主要定位在細胞漿里。當FLAG-WT-AQP0與Myc-MU-AQP0共轉染時，野生型與突變型蛋白均定位在細胞漿內。
　　結論:
　　在該家系中篩查到的MIP基因上的無意突變(c.657 C＞G)是該家系的致病突變。突變蛋白對野生型蛋白的顯性負效應使野生型