一個成骨不全家系的突變篩查.pdf

1、成骨不全(osteogenesis imperfecta，OI)是一種常染色體顯性遺傳為主的單基因遺傳病。約每兩萬個新生兒中就有一個OI患兒，以中國2002年-2011年10年的人口出生數(shù)推算，平均每年約有800個患兒。成骨不全臨床表現(xiàn)主要為骨折和骨畸形，部分伴有藍鞏膜、耳聾等癥狀。根據(jù)臨床癥狀，成骨不全癥可分為Ⅰ型—Ⅶ型，其中，Ⅰ型癥狀最輕，Ⅱ型最嚴重。該病90％是由于COL1A1/COL1A2基因突變導致Ⅰ型膠原蛋白結(jié)構(gòu)或骨含量的改

2、變。
　　 目的：通過臨床資料分析本研究收集的1個成骨不全家系的遺傳方式，鑒定該家系的OI分型，確定突變篩查的候選基因，尋找突變位點，以闡明該家系的遺傳基礎，為該病的診斷、預防和遺傳咨詢工作提供依據(jù)。
　　 方法：本研究收集了一個來自中國河南的家系，共有35名家族成員，其中13人為患者，臨床表現(xiàn)為輕度骨質(zhì)脆弱，無骨骼畸形，身高正常或稍矮，鞏膜為藍色或淡藍色，牙質(zhì)發(fā)育正?；蛏L不全皆有。通過家系患者的臨床癥狀與Sillen

3、ce提出的經(jīng)典分型標準的比對，其臨床表現(xiàn)和癥狀的嚴重程度最接近Ⅰ型成骨不全的特征，并確定突變篩查的目的基因。抽取家系部分成員的外周血，抽提DNA并將先證者淋巴細胞建株。應用PCR擴增的方法對先證者及兒子的COL1A1基因所有的外顯子與部分內(nèi)含子區(qū)域進行突變檢測，然后以建株的患者來源淋巴細胞系為材料，用RT-PCR和cDNA測序來研究突變對COL1A1基因剪接的影響。
　　 結(jié)果：⑴突變篩查結(jié)果:該家系患者的COL1A1基因上發(fā)現(xiàn)

4、一個未見報道的剪接位點突變c.3207+1G＞A。⑵RT-PCR和cDNA測序結(jié)果:對逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA進行序列分析顯示，在c.3200位后出現(xiàn)大量套峰，推測該突變導致COL1A1基因轉(zhuǎn)錄后產(chǎn)生異常剪接本。cDNA克隆測序后發(fā)現(xiàn)該家系患者的COL1A1基因表達存在兩個剪接本，其中一個剪接本為正常剪接本，另一個在43號外顯子上缺失了8個堿基r.3200-3207del，導致COL1A1基因的閱讀框發(fā)生改變，Ⅰ型膠原蛋白α1鏈第1067位后