膽固醇代謝異常與膽石病發(fā)生的分子生物學(xué)研究.pdf

1、研究背景和目的：機體膽固醇代謝異常被認為是導(dǎo)致膽汁膽固醇過飽和及膽石形成的主要原因。肝臟與小腸是參與膽固醇代謝的主要臟器。我們課題組曾對膽石患者肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因的表達差異進行分析。在此基礎(chǔ)上，本研究分析了膽石患者近段空腸粘膜膽固醇吸收相關(guān)基因的表達。鑒于多數(shù)膽固醇代謝相關(guān)基因受核受體.LXRs調(diào)節(jié)，本研究以動物模型和Lxrs激動劑為基礎(chǔ)，進一步研究基礎(chǔ)狀態(tài)下和Lxrs作用下不同成石易感性小鼠的肝臟、小腸以及巨噬細胞膽固醇代謝相關(guān)基

2、因表達的差異，探討膽固醇代謝異常在膽石病發(fā)生中的分子生物學(xué)機制。 材料與方法：第一部分，臨床研究收集19例膽囊結(jié)石患者(年齡：53.1±3.7；男/女：13/6)與22例無結(jié)石對照(年齡：55.8±3.4；男/女：11/11)的近段空腸粘膜、膽汁與靜脈血。Real-timePCR方法檢測近段空腸粘膜ABCG5、ABCG8、NPCIL1、SRB1、MTTP、ACAT2、HMGCR、ABCA1以及LXRα基因mRNA表達。分析血清與

3、膽汁的脂質(zhì)成分。第二部分，動物實驗研究以Lxrs激動劑T0901317分別喂養(yǎng)雄性C57BL/6小鼠(實驗組/對照組：9/9)與雄性AKR小鼠(實驗組/對照組：7/6)，采集肝臟、小腸、腹腔巨噬細胞、膽汁以及血清。Real-timePCR方法分別檢測Abcg5、Abcg8、Srb1、Mttp、Hmgcr、Abca1、Acat2、Cyp7a1、Srebp-1c、Srebp2、Npcll1以及Abcg1基因mRNA表達。分析血清與膽汁的脂質(zhì)

4、成分。 結(jié)果：臨床研究的膽石組患者膽汁膽固醇飽和指數(shù)較對照組明顯升高(P＜0.01)。血清脂質(zhì)分析未發(fā)現(xiàn)兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異。近段空腸粘膜ABCG5與ABCG8基因mRNA表達顯著正相關(guān)(r=0.79，P＜0.01)，且分別與LXRα存在顯著的正相關(guān)性(ABCG5，r=0.43，P＜0.01；ABCG8，r=0.44，P＜0.01)。膽石組與對照組的近段空腸粘膜膽固醇吸收相關(guān)基因mRNA表達沒有統(tǒng)計學(xué)差異。女性膽石組患者近段空腸粘

5、膜ABCG5與ABCG8表達較女性對照分別升高114％與74％(ABCG5與ABCG8，均P＜0.05)。MTTP和SRB1表達則分別是女性對照的2.13倍和2.72倍(MTTP與SRB1，均P＜0.01)。動物實驗研究中，C57BL/6小鼠膽汁膽固醇水平是AKR小鼠的1.48倍，T0901317喂養(yǎng)后分別升高39％與10％。C57BL/6小鼠肝臟Mttp與小腸Abcg8表達低于AKR小鼠(Mttp與Abcg8，均P＜0.05)。T09

6、01317喂養(yǎng)后兩種小鼠肝臟Abcg5、Abcg8、Abca1以及Srebp-1c表達顯著升高(Abcg5,Abcg8與Srebp-1c,均P＜0.01;Abca1，P＜0.05)。兩種小鼠小腸Abcg5、Abcg8以及Abca1表達也出現(xiàn)上調(diào)(Abcg5,Abcg8與Abca1，均P＜0.01)。AKR小鼠還出現(xiàn)小腸Mttp與Acat2表達下調(diào)以及Srebp2表達升高(Mttp、Acat2與Srebp2，均P＜0.05)。T09013

7、17喂養(yǎng)后，C57BL/6小鼠腹腔巨噬細胞Abca1表達上調(diào)明顯(P＜0.05)。 結(jié)論：1.膽石病患者近段空腸粘膜膽固醇吸收相關(guān)基因的mRNA表達與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異，表明不同人群小腸膽固醇吸收相關(guān)基因表達差異可能不是膽石病發(fā)生的主要遺傳因素。2.女性膽石病患者近段空腸粘膜SRB1表達升高可能拮抗了因ABCG5與ABCG8上調(diào)導(dǎo)致的膽固醇丟失。3.C57BL/6小鼠肝臟Mttp與小腸Abcg8基因表達降低可能導(dǎo)致肝臟合成VLD