白藜蘆醇與白藜蘆醇苷的藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：本研究以人肝癌細(xì)胞（HepG2細(xì)胞）、人乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-231細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞）為模型，從藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)的角度出發(fā)，研究白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對(duì)這三種細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，以及HepG2細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的攝取規(guī)律，為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用噻唑藍(lán)（MTT）法考察不同濃度（15、30、50、100、150、300μmol/L）白藜蘆醇與白藜蘆醇苷對(duì)人肝癌細(xì)

2、胞HepG2、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231以及人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長(zhǎng)抑制作用。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度（1、30、300μmol/L）白藜蘆醇與白藜蘆醇苷對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響。
　　3.分別以白藜蘆醇與白藜蘆醇苷為原料合成白藜蘆醇一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物、白藜蘆醇苷一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物。
　　4.用熒光顯微鏡觀察HepG2細(xì)胞、MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)30μmol/L白藜蘆醇與白藜蘆醇

3、苷的攝取情況。
　　5.分別將100μmol/L白藜蘆醇和白藜蘆醇苷與HepG2細(xì)胞孵育15、30、60、120、180min，用10、20、50、100、200μmol/L的白藜蘆醇與白藜蘆醇苷與HepG2細(xì)胞孵育，采用電噴霧正離子電離、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式，通過(guò)LC/MS/MS檢測(cè)HepG2細(xì)胞裂解液中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷以及二者的葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物的含量。
　　結(jié)果：
　　1.隨著濃度的增加，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對(duì)H

4、epG2細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率增加，且呈濃度依賴(lài)性。作用48h后，與同劑量白藜蘆醇苷相比，30、50、100μmol/L白藜蘆醇抑制HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的作用較弱，但300μmol/L時(shí)，白藜蘆醇的抑制作用增強(qiáng)。作用72h后，150、300μmol/L的白藜蘆醇的抑制作用比白藜蘆醇苷強(qiáng)（p<0.05）。在15～300μmol/L范圍內(nèi)，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的抑制率都呈濃度依賴(lài)性，孵育72h的抑制率高于48h的抑制率。與

5、同劑量白藜蘆醇苷相比，白藜蘆醇對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用更強(qiáng)（p<0.05）。白藜蘆醇對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率呈濃度依賴(lài)性，白藜蘆醇苷與MCF-7細(xì)胞孵育48h時(shí)，濃度低于300μmol/L白藜蘆醇苷不能顯著抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，而孵育72h時(shí)抑制率呈濃度依賴(lài)性。與白藜蘆醇苷相比，相同劑量的白藜蘆醇對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用更強(qiáng)（p<0.05）。
　　2.高濃度（300μmol/L）白藜蘆醇和白藜蘆醇苷均能引起HepG2細(xì)胞的凋

6、亡，但是白藜蘆醇比白藜蘆醇苷引起的凋亡更顯著。
　　3.化學(xué)方法合成得到白藜蘆醇一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物和白藜蘆醇苷一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物。
　　4.熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果表明，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷都能快速被HepG2細(xì)胞以及MDA-MB-231細(xì)胞攝取，并且隨著時(shí)間增加，攝取量增加。
　　5.細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明白藜蘆醇和白藜蘆醇苷都能迅速被HepG2細(xì)胞攝取，白藜蘆醇在30min就能達(dá)到最大攝取量，而白藜蘆醇苷的

7、攝取量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，180min仍未達(dá)到飽和。相同濃度的白藜蘆醇攝取進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的量高于白藜蘆醇苷，30min時(shí)細(xì)胞中白藜蘆醇的量為48.9μmol/L·mgprotein，白藜蘆醇苷的量為1.3μmol/L·mgprotein，前者約為后者的38倍。隨著藥物濃度的增加，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷在細(xì)胞中的攝取量也隨著藥物濃度的加大而增加，200μmol/L時(shí)仍未達(dá)到飽和。白藜蘆醇在細(xì)胞中的攝取量顯著高于相同濃度的白藜蘆醇苷（p<0.05

8、）。
　　結(jié)論：
　　1．白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對(duì)HepG2細(xì)胞、MDA-MB-231細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)均有顯著的抑制作用，抑制率呈濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用比相同濃度的白藜蘆醇苷更強(qiáng)（p<0.01）。與MCF-7細(xì)胞相比，白藜蘆醇對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用更強(qiáng)（p<0.05）。
　　2．高濃度（300μmol/L）的白藜蘆醇與白藜蘆醇苷均能顯著誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡，與

9、相同濃度的白藜蘆醇苷相比，白藜蘆醇誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的能力更強(qiáng)（p<0.05）。
　　3．本文建立的同時(shí)檢測(cè)白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、白藜蘆醇一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物以及白藜蘆醇苷一取代葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物的LC/MS/MS方法，分析結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好。
　　4．HepG2細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的攝取呈濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。HepG2細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇的攝取速度和攝取量顯著高于白藜蘆醇苷（p<0.05）。