柑橘黃化脈明病毒分子檢測及生物學(xué)研究.pdf

1、柑橘黃化脈明病毒（Citrusyellow clearing vein virus，CYVCV）作為2009年我國發(fā)現(xiàn)侵染柑橘的一種新病毒，對其分子特性和生物學(xué)特性研究較少。已有研究表明，CYVCV主要危害檸檬和酸橙，造成典型的黃化脈明癥狀。CYVCV可侵染多個柑橘品種，已有實驗表明該病毒可高效地通過蚜蟲從檸檬傳播到豆科植物，在柑橘之間傳播的昆蟲傳播介體尚未明確，因此該病毒病害可能存在我國柑橘生產(chǎn)中大流行的風(fēng)險。為明確CYVCV在我國柑

2、橘上的分布特點及CYVCV的分子特性和生物學(xué)特性，本研究利用RT-PCR對采集我國7個省份的柑橘樣品進(jìn)行了CYVCV檢測，測定了甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因分離物和外殼蛋白編碼基因序列分析CYVCV的分子特性，利用CYVCV感染的檸檬植株芽片嫁接到不同種類柑橘進(jìn)行生物學(xué)特性研究。取得的研究結(jié)果如下:
　　1.2013-2015年期間對采自湖南、湖北、江西、四川、云南、貴州和浙江7個省的450份柑橘樣品利用RT-PCR技術(shù)檢測CYVCV，共有

3、77份柑橘樣品被檢測到CYVCV，有6個省份的樣品檢測到CYVCV陽性（浙江樣品外），其中湖南的樣品檢出率達(dá)到34.2％;對采自湖北的柑橘樣品進(jìn)行CYVCV的RT-PCR檢測其中當(dāng)陽樣品的檢出率高達(dá)53.3％，但有些地區(qū)樣品中未檢測到CYVCV;通過對攜帶有CYVCV的樣品進(jìn)行癥狀進(jìn)行觀察和分析，葉背面葉脈附近水漬狀斑、葉脈凸起、葉脈透明和葉脈黃化可能與CYVCV的侵染相關(guān)，在有些未表現(xiàn)癥狀的樣品中也檢測到CYVCV陽性，說明CYVCV

4、侵染某些柑橘品種存在潛隱的特點。
　　2.對采集自湖南、湖北、江西、云南、四川和貴州6個省份的陽性柑橘樣品上的， CYVCV分離物的甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因和外殼蛋白編碼基因進(jìn)行了測定，這些CYVCV分離物的met中的核苷酸相似性和氨基酸相似性均達(dá)到98％以上，與土耳其分離物Y1的核苷酸相似性為97-98％，氨基酸相似性98-99.3％，同時發(fā)現(xiàn)CYVCV中國分離物相對于土耳其分離物存在多個共變異位點;系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)CYVCV分離物

5、分為兩大組:Ⅰ組和Ⅱ組，其中中國分離物全部聚集在Ⅰ組中，土耳其分離物Y1和巴基斯坦分離物PK聚集在Ⅱ組。
　　3.將感染CYVCV的檸檬芽片接種到甜橙、萊檬、枳殼和HB柚的柑橘實生苗，翌年春季在甜橙新梢葉片上表現(xiàn)脈明、脈黃和褪綠斑等癥狀，而在萊檬、枳殼和HB柚植株上未觀察到明顯癥狀，采用qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，在接種CYVCV后2年生甜橙植株上部枝條葉片中CYVCV含量明顯高于中部和下部枝條葉片，且隨接種時間延長，CYVCV在上部