柞蠶核型多角體病毒分子生物學及桿狀病毒感染特性.pdf

1、把感染柞蠶腎的ApNPV進行分離純化,提取較純凈的ApNPV,抽提ApNPV基因組DNA,并對ApNPV構建了HindⅢ、SalⅠ兩種限制性內(nèi)切酶的DNA片段文庫,進行了部分基因的序列分析,為該病毒的全基因組序列的進行打下了基礎.對ApHPV、w-BmNPV(野桑蠶)、BmNPV進行RAPD分析,研究結果表明,ApNPV與CfNPV的進化關系最近,與w-BmNPV的親緣關系較遠,與BmNPV的親緣關系最遠.為了便于檢測核型多角體病毒對昆

2、蟲的感染情況,將熒光標記分子GFP克隆到昆蟲桿狀病毒轉移載體pBacPAK8中,與經(jīng)Bsu36I酶切線型化的Ac-BacPAK6共轉染Sf21細胞,經(jīng)空斑純化獲得重組病毒Ac-BacPAK6-GFP.可以檢測病毒在不同細胞中的增殖和在蟲體的不同組織中的增殖.把單一的病毒粒子分別感染BmN和Sf21細胞作為對照,同時把不同的病毒粒子混合,再分別感染BmN和Sf21細胞.研究結果表明:ApNPV病毒不能感染BmN和Sf21細胞.當其DNA單

3、獨轉染到細胞時,細胞在不同程度上表現(xiàn)出凋亡癥狀,這是病毒與細胞之間不親和的表現(xiàn);AcMNPV和BmNPV在親和的病毒的協(xié)同下,分別能在BmN和Sf21細胞中復制.BmNPV在單獨感染Sf21細胞時表現(xiàn)出的個別細胞有類似多角體的顆粒的現(xiàn)象,有待構建重組GFP的BmNPV以進一步證實;AcMNPV和BmNPV的病毒粒子可以進入BmN及Sf21細胞,并能釋放出DNA,這是以前試驗并沒有注意到的;ApNPV的部分序列的同源性分析表明,與CfNP