寧夏地區(qū)博爾納病病毒感染的細胞和分子生物學研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩68頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:調查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對陽性檢測樣本的核苷酸序列進行連接測序,比較分析BDV p24基因序列,建立病毒株的種系發(fā)生樹,闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源;應用轉染的OL作進一步的病毒核蛋白的細胞內定位研究,初步探討病毒的感染和發(fā)病機制。
   方法:應用巢式逆轉錄熒光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技術檢測中國寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDV p24和p40基因片段;對檢

2、測BDV p24和p40基因片段均為陽性標本的p24基因片段進行連接、克隆、測序,并應用EMBL、DNASP4.0和 MEGA4.0軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度,構建Neighbor-Joining基因系統(tǒng)發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源;對轉染的OL應用激光共聚焦顯微鏡技術和Western blot的方法觀察病毒核蛋白在細胞內的表達定位。
   結果:在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測到BDV

3、p24和p40陽性基因片段,檢出率分別為3.68[%](6/163)和1.27[%](9/710);對15例陽性檢出標本進行連接、克隆、測序,連同14例前期檢測序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為96.5[%]~100[%],氨基酸的同源相似度為95.3[%]~100[%]。與德國馬源性標準株He/80同源相似度較高。構建基因的系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨立的支系,其余陽性

4、檢出序列形成混合支系,其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國的馬、日本的綿羊形成了‘德國-中國(寧夏)-日本’的混合支系;在轉染BDV p40基因片段的熒光表達質粒的 OL內,激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細胞漿和細胞膜中;Western blot的結果顯示在細胞膜蛋白中存在核蛋白,而在細胞漿中未檢測到該蛋白。
   結論:中國寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染;寧夏地區(qū)人和動物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨立株和國外傳入基

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論