戊型肝炎病毒感染的血清學(xué)特征及分子生物學(xué)診斷.pdf

1、戊型肝炎(H epatitis E，HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)引起的一種急性病毒性肝炎，主要經(jīng)糞一口途徑傳播，常因飲用水源被污染而導(dǎo)致暴發(fā)流行，散發(fā)病例呈現(xiàn)全球分布。在我國的很多地區(qū)都有HEV感染的報(bào)道，HE流行率在我國為17.2％左右，各省市分布不均，農(nóng)村HEV感染率高于城市。根據(jù)HEV各分離株基因序列的核苷酸同源性、氨基酸同源性的大小以及系統(tǒng)進(jìn)化樹的分析，目前將世界上HEV主要分為4個(gè)基因型

2、。臨床上急性HEV感染率占總?cè)丝诘?.5％～1％，感染率隨年齡增加而增加，20歲左右達(dá)到感染高峰，發(fā)病者主要為青壯年，其臨床表現(xiàn)主要是肝炎病毒引起的黃疸、急性肝壞死等。一般呈良性經(jīng)過，但孕婦感染情況較重，死亡率高達(dá)15％N25％，是一種全國普遍流行、危害比較嚴(yán)重的疾病。
　　 HEV是無包膜單股正鏈RNA病毒。HEV基因組全長約7.2～7.6kb，由5’和3’非結(jié)構(gòu)區(qū)及3個(gè)相互重疊的編碼閱讀框(Open Reading Fram

3、es.ORF)ORF1，ORF2和ORF3組成，基因組結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。其中ORF2編碼病毒衣殼蛋白，富含HEV重要抗原表位。HEV組織培養(yǎng)研究尚不成熟，目前的診斷主要是采用間接酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法檢測血清中的抗體。但因?yàn)镠EV感染窗口期或患者自身免疫功能以及檢測方法的特異性等原因都會(huì)給HEV診斷帶來不確定性；HEV RNA檢測是目前判斷HEV是否存在的標(biāo)準(zhǔn)之一，但由于HEV存在多種基因型，給臨床研究工作和疫苗的研制帶來了很多

4、困難。鑒于此，本課題建立了一種快速、敏感、特異性強(qiáng)的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Nest ReverseTranscription- Polymerase Chain Reaction，nRT-PCR)方法，用于血清HEV RNA的定性檢測，并探討其在輔助臨床進(jìn)行戊型肝炎早期診斷中的價(jià)值。
　　 研究目的:
　　 1、了解近年戊型肝炎病毒感染患者的臨床特征及血清學(xué)特點(diǎn)；分析比較單純感染和重疊感染的戊型肝炎患者的血清學(xué)特征異

5、同，闡明重疊感染的戊型肝炎患者病情的發(fā)展及預(yù)后情況。為HEV的臨床診治和進(jìn)一步研究提供參考。
　　 2、建立巢式逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增血清HEV RNA方法，評價(jià)其應(yīng)用于急性戊型肝炎患者血清HEV RNA檢測的臨床意義。
　　 研究方法:
　　 1、收集667例戊型肝炎病毒(HEV)感染以及戊型肝炎病毒重疊感染患者的相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)并與乙型肝炎病毒(HBV)感染、丙型肝炎病毒(HCV)感染患者進(jìn)行回顧性資料分析。診斷標(biāo)準(zhǔn)

6、依據(jù)2000年(西安)中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的“病毒型肝炎防治方案”中的病毒型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。凡抗-HEV IgM和/或抗-HEV IgG陽性，并具有急性病毒性肝炎的臨床表現(xiàn)和肝功能異常者，診斷為急性戊型肝炎。
　　 2、對GenBank數(shù)據(jù)庫中的戊型肝炎病毒全基因組序列進(jìn)行分析比對，并針對國內(nèi)流行的戊型肝炎病毒株序列，選擇位于ORF2的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，建立nRT- PCR方法，并檢測126例急性戊

7、型肝炎患者、20例甲型肝炎患者、30例乙型肝炎患者和30例丙型肝炎患者血清中戊型肝炎病毒RNA，以30例健康獻(xiàn)血者作為對照組。全部樣品提取RNA后進(jìn)行nRT- PCR檢測HEV RNA，并與檢測抗-HEV IgM的方法進(jìn)行比較。
　　 研究結(jié)果:
　　 1、HEV感染病例多分布在21～40歲年齡段；且女性多于男性。在HEV陽性患者中，青少年組與青年組、中年組，老年組在ALP項(xiàng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。老年組HEV感染患者的各項(xiàng)

8、指標(biāo)都處于較高水平；HEV重疊感染患者的年齡高峰都是在21～40歲之間，低年齡組與高年齡組的多重感染率均較低。HEV感染組與HEV-HBV重疊感染組比較，ALP、TBIL存在明顯差別，膽汁淤積增多，黃疸程度加深。HEV感染組與HEV-HCV重疊感染組LDH差異顯著，肝細(xì)胞損傷明顯。
　　 2、126例急性戊型肝炎患者血清中有67例(53.2％) HEV RNA陽性。對照組血清HEVRNA檢測均為陰性。與血清抗-HEV IgM檢測

9、結(jié)果比較，HEV RNA檢測的總符合率為80.91％(102/126)，兩種方法的檢測結(jié)果具有良好的一致性。nRT- PCR方法檢測HEV RNA與血清抗-HEV IgM檢測方法存在明顯的差異，不能相互替代，而有一定的互補(bǔ)性。3例患者的首份血清檢測為HEV RNA陽性，但抗-HEV IgM為陰性，系列追蹤檢測，都相繼出現(xiàn)抗-HEV IgM。急性戊型肝炎患者血清HEV RNA的檢出多在發(fā)病的1～12天內(nèi)。
　　 研究結(jié)論: