利膽排毒口服液抗內(nèi)毒素的作用研究.pdf

1、目的： 1．對中西醫(yī)藥治療內(nèi)毒素血癥的現(xiàn)代研究思路、方法及成果進行歸納與總結，并探索新的研究途徑與方法。 2．研制開發(fā)治療內(nèi)毒素血癥的中藥復方新制劑-----利膽排毒口服液。 3．探討利膽排毒口服液防治內(nèi)毒素血癥的機制，驗證該制劑的有效性、安全性。 方法： 1．通過文獻研究，對中西醫(yī)抗內(nèi)毒素研究成果進行歸納總結，提出內(nèi)毒素血癥病機假說、相應治療方案，并進行了理論論證。以此假說為指導，選擇有效的單味

2、藥和基礎方，再通過實驗確定最佳處方組成。 2．通過體外鱟試劑反應，篩選有效的抗內(nèi)毒素單味藥或活性成分。 3．用二倍稀釋法，研究單味中藥的抗大腸桿菌作用，并求出各藥的最低抑菌濃度(MIC)。 4．選擇幾種抗菌作用較強的中藥與大腸桿菌作用，研究大腸桿菌釋放內(nèi)毒素的水平。 5．以醋酸鉛(PbAc)為增敏劑制作小鼠內(nèi)毒素病理模型，為中藥處方篩選及其它藥效學研究打下基礎。 6．根據(jù)處方組成，結合各單味藥的理

3、化性質、預試驗藥物與藥效學關系、臨床最佳適用劑型需求等，通過文獻研究及正交試驗法優(yōu)選提取與純化工藝條件，確定利膽排毒口服液制備成型工藝。 7．以小鼠為實驗對象，灌胃200％利膽排毒口服液，觀察用藥后小鼠的活動及死亡情況，研究該制劑的安全性。 8．分別以PbAc和D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠為實驗對象，灌胃給藥，觀察用藥后小鼠的死亡率。 9．采用腸管運動在體實驗法測定小鼠排便時間、頻率和碳粒腸推進距離。

4、 10．以小鼠為實驗對象，灌胃利膽排毒口服液，觀察對二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓腫脹、醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響。 11．通過小白鼠碳粒廊清試驗，觀察利膽排毒口服液的免疫清除作用。 12．以大鼠膽汁流量的變化為指標，研究利膽排毒口服液是否有利膽作用；CCL4肝損傷試驗研究利膽排毒口服液的保肝作用。 13．給大鼠注入利膽排毒口服液后，采取膽汁及尿液，采用顯色基質法測定內(nèi)毒素含量。 14．采用鱟試劑試管

5、凝集反應、顯色基質偶氮法進行利膽排毒口服液體外抗內(nèi)毒素的實驗研究。采用電鏡法觀察其對內(nèi)毒素顯微結構的直接裂解作用。 15．用二倍稀釋法，研究利膽排毒口服液的抗大腸桿菌作用，并求出利膽排毒口服液的最低抑菌濃度(MIC)。 16．用大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)靜脈注射造成家兔內(nèi)毒素血癥模型，觀察利膽排毒口服液對模型動物的解熱作用。 17．用大腸桿菌內(nèi)毒素靜脈注射造成家兔內(nèi)毒素血癥模型，檢測利膽排毒口服液對模型動物的 LP

6、S 含量、腫瘤壞死因子水平的影響。 18．給兔灌服利膽排毒口服液后，采取血清進行血清滅活內(nèi)毒素研究。 19．以兔為實驗對象，注射大劑量內(nèi)毒素，觀察用藥或不用藥兔的組織切片病理結果。以D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠為實驗對象，灌胃給藥，觀察用藥后小鼠的組織切片病理結果。 結果： 1．提出了內(nèi)毒素血證病機假說、治療方案，并進行了理論論證。 2．根據(jù)假說，提出了中藥抗內(nèi)毒素血癥的新組方思路，在此

7、組方思路指導下，將茵陳蒿湯為基礎進行加減，篩選出抗內(nèi)毒素血癥新復方---利膽排毒口服液。 3．中藥對細菌內(nèi)毒素釋放的影響研究結果表明，不同中藥對內(nèi)毒素釋放影響不同。中藥對內(nèi)毒素釋放的狀況與抗生素相比有著很大差異，這種特征有利于中藥對內(nèi)毒素血癥的控制與治療。 4．各中藥抗大腸桿菌(G-)的最小抑菌濃度(MIC)分別為黃連0.125、赤芍0.125、生大黃0.25、虎杖0.25、連翹0.25、敗醬草0.25、蒲公英0.5、枳

8、實0.5、白頭翁0.5、金銀花0.5、黃芩0.5、丹參0.5、茵陳1、甘草1、梔子1、柴胡1(g/mL)；利膽排毒口服液MIC為0.125 g/mL。 5．各單味藥或活性成分抗內(nèi)毒素最小稀釋濃度分別為黃連素 0.1：125、苦參堿0.1、脫氧膽酸鈉 0.1：625、甘氨酸 0.5、黃芩苷 0.1：625、梔子苷 0.1：25、甘草0.1、金銀花0.1、大黃 0.1：5、連翹 0.1、白頭翁 0.1：5、黃芪 0.1：5、金錢草0

9、.1(g/mL)：利膽排毒口服液抗內(nèi)毒素最小稀釋濃度為0.1：125 g/mL。 6．利膽排毒口服液制備工藝穩(wěn)定可行，質量穩(wěn)定可控。 7．利膽排毒口服液體外鱟試劑反應、電鏡超微結構觀察顯示，利膽排毒口服液對內(nèi)毒素有直接的破壞、降解、滅活作用。 8．PbAC對小鼠增敏明顯，結果準確可靠。對比研究結果表明，以PbAC為增敏劑制作的小鼠內(nèi)毒素病理模型是成功的。 9．以PbAC增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠，對照組死亡

10、率100％，利膽排毒口服組死亡率0％；以D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠，對照組死亡率100％，地塞米松組死亡率60％，利膽排毒口服組死亡率20％。 10．小鼠體內(nèi)實驗結果表明，利膽排毒口服液能增強小鼠吞噬功能，降低小鼠腸毛細血管通透性，對抗二甲苯引起的炎癥反應，促進小鼠腸推進功能。 11．最大耐受量試驗顯示，利膽排毒口服液對小鼠無毒副作用。 12．大鼠體內(nèi)實驗結果表明，利膽排毒口服液能促進膽汁分泌，保護肝

11、臟免受四氯化碳的損傷，減少膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量。 13．兔體內(nèi)實驗結果表明，利膽排毒口服液能抑制模型動物的發(fā)熱效應，減少兔血漿內(nèi)毒素含量，降低血漿腫瘤壞死因子(TNF-a)水平。 14．兔血清藥理學實驗表明，利膽排毒口服液能增強兔血清體外滅活內(nèi)毒素的能力。 15．利膽排毒口服對大劑量內(nèi)毒素所引起的兔病理損傷有良好的防護作用。對D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠病理損傷也有良好的防護作用。 結論：

12、 1．利膽排毒口服液制備工藝穩(wěn)定，質量可控，具有多方面的藥理作用，毒副作用小，對內(nèi)毒素血癥具有明確的療效。其對內(nèi)毒素血癥的治療一方面是其對內(nèi)毒素的直接裂解、滅活，另一方面是通過利膽、促進腸推進、解熱、抗炎、降低體內(nèi)炎性介質等多途徑、多靶點的作用來實現(xiàn)的。 2．在中醫(yī)理論指導下，以最新醫(yī)藥研究成果為基礎，從中藥中篩選出了對內(nèi)毒素損傷小鼠高保護率的新復方---利膽排毒口服液。利膽排毒口服液的研究，驗證了我們假說的正確性，也驗證了

13、通過利膽排毒為主多法聯(lián)合運用來防治內(nèi)毒素性疾病設想的可行性，將為內(nèi)毒素血癥的防治提供新的手段，相信其將具有良好的開發(fā)、應用前景。 創(chuàng)新點： 1．提出了內(nèi)毒素血證病機假說，并進行了理論論證。 2．根據(jù)假說，擬定了中藥抗內(nèi)毒素血癥的組方，對組方理論進行了理論探討并進行實驗研究，結果表明該組方對PbAC為增敏劑的致命性小鼠內(nèi)毒素血癥模型保護率可達到100％，對氨基半乳糖致敏的致命性小鼠內(nèi)毒素血癥模型保護率可達到80％，