去甲基化劑誘導肺腺癌細胞RASSF1A基因表達及其對肺腺癌細胞生物學行為影響的研究.pdf

1、目的:RASSFIA是位于3p21.3區(qū)域的新型抑癌基因，其啟動子區(qū)的高甲基化導致該基因在某些腫瘤組織和腫瘤細胞中表達缺失。本研究用去甲基化劑5-氮雜-2’脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺腺癌細胞株A549，誘導高甲基化失活的抑癌基因RASSFIA重新表達并觀察其對肺腺癌細胞生物學行為的影響。 方法:分別使用濃度為5×10<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol／L的5-Aza-CdR處理

2、肺腺癌細胞株A549，對照組細胞以PBS處理。通過RT-PCR檢測處理后抑癌基因RASSFIA mRNA表達的改變，MTT法觀察處理后細胞的生長活性，并應用流式細胞術進行細胞周期、凋亡率的分析。 結果: (1)肺腺癌細胞株A549經(jīng)不同濃度之5-Aza-CdR處理后，RASSFIA mRNA表達缺失的A549細胞檢出基因重新表達mRNA，5×10<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol

3、／L三個處理組RASSFlA mRNA表達相對量分別為(96.87±1.09)％、(89.90±2.88)％、(81.81±5.83)％，組間差異有顯著性，對照組A549細胞無RASSFlAmRNA表達； (2)由MTT法繪制細胞生長曲線，5-Aza-CdR處理后的A549細胞與對照組相比，生長速度出現(xiàn)不同程度減慢； (3)5×i0<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol／L三個處理組

4、細胞G<'l>期比例分別為(42.5±1.1)％、(45.3±0.6)％、(43.3±0.7)％，對照組為(40.1±0.3)％，處理組與對照組比較差異無顯著性；5×10<'-5>mol／L、5×10<'-5>mol／L、5×10<'-7>mol／L三個處理組細胞凋亡率分別為(19.5±2.1)％、(15.9±0.8)％、(12.3±1.5)％，處理組間差異有顯著性，對照組為(4.2±0.8)％，處理組與對照組比較差異有顯著性。

5、 (4)不同濃度5-Aza-CdR作用使A549 RASSFlA mRNA表達的量與凋亡率呈正顯著相關。 結論: (1)肺腺癌A549細胞存在著RASSFlA的表達缺失。 (2)5-Aza-CdR可實現(xiàn)啟動子去甲基化誘導肺腺癌A549細胞重新表達RASSFlA，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。 (3)5-Aza-CdR可抑制肺腺癌A549細胞的生長、誘導細胞凋亡，且與RASSFlA基因表達呈正相關，這提示RA