二球懸鈴木花粉主要變應原編碼基因的克隆與表達.pdf

1、背景：近數(shù)十年以來，世界范圍內(nèi)各種變態(tài)反應病發(fā)病率明顯增加，尤其在工業(yè)化程度較高的發(fā)達國家，各種過敏性疾病嚴重影響居民生活質(zhì)量，提高醫(yī)療費用，造成經(jīng)濟損失，已經(jīng)成為世界性衛(wèi)生問題。人群中約有五分之一屬于過敏體質(zhì)，有可能發(fā)生過敏性疾病。世界衛(wèi)生組織已將此類疾病列為“21世紀重點研究和預防的疾病”。 花粉是最常見的氣傳吸入性過敏原之一，可引起多種過敏性疾病，如過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎等?！盎ǚ郯Y”即季節(jié)性變應性鼻炎，又稱

2、枯草熱。 二球懸鈴木花粉是近年來發(fā)現(xiàn)的我國南方地區(qū)常見的引起特應性體質(zhì)者發(fā)生過敏反應的過敏原，對其變應原組分和分子生物學特點的研究開始受到研究者重視。 用基因工程制備人工重組變應原具有天然變應原提取物不可比擬的優(yōu)越性，國外已開始研制常見變應原的人工重組蛋白，逐步應用于臨床診斷和特異性免疫治療。 目的：提取天然二球懸鈴木花粉總RNA，制備其主要變應原的編碼基因克隆，誘導表達人工重組蛋白，鑒定其生物學活性和免疫學特異

3、性。 方法：采集二球懸鈴木花粉，Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計其主要變應原編碼基因的特異性引物，用PCR擴增目的片段。將擴增的目的片段用雙酶切法與質(zhì)粒pET32a連接，用CaCl2法轉(zhuǎn)入工程菌DH5α制備基因克隆。提取基因克隆導入工程菌BL21a(DE3)，堿裂解法提取DNA，用瓊脂糖電泳鑒定目的片段存在。IPTG誘導表達變應原蛋白，WesternBlotting法鑒定抗原特異性。 結(jié)果：IPTG終濃