不同基因型懸鈴木的離體培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、二球懸鈴木在我國(guó)是一種重要的園林綠化樹(shù)種，具有良好的雜種優(yōu)勢(shì)。但是在4、5月份花粉、種毛隨處飄落，不僅污染環(huán)境，還會(huì)嚴(yán)重影響人們生活。為解決這一問(wèn)題，許多科研工作者在改進(jìn)栽培管理措施、選育少果品系、化學(xué)或物理誘變等方面做了許多研究，但是都不能從根本上解決問(wèn)題。通過(guò)組織培養(yǎng)和基因工程進(jìn)行遺傳改良是一種更加有效的育種手段。
　　 懸鈴木研究的最終目的是培育不育的新品種，這一目標(biāo)要通過(guò)轉(zhuǎn)化不育基因來(lái)實(shí)現(xiàn)。進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化需要首先建立穩(wěn)定的

2、快繁體系和高頻的植株再生體系。本研究中取不同基因型懸鈴木的外植體培養(yǎng)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室保存的無(wú)菌材料，建立新的快繁體系和葉片再生體系，并優(yōu)化已有的懸鈴木轉(zhuǎn)化體系，嘗試將早花基因PtLFY轉(zhuǎn)入懸鈴木中。另外，對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的抗性植株進(jìn)行增殖培養(yǎng)、PCR檢測(cè)和練苗移栽。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.取PE、P19、四倍體的柄下芽進(jìn)行消毒培養(yǎng)，結(jié)果表明取秋季的柄下芽或春季新萌發(fā)的枝條中部的4-6個(gè)芽培養(yǎng)萌芽率較高。升汞消毒最佳時(shí)間為8min（

3、11月）或12min（4月），在啟動(dòng)培養(yǎng)基MS+6-BA0.3 mG/L+NAA0.05mg/L上，P19的柄下芽萌芽率最高；PE的萌芽率為33.3％；四倍體柄下芽的誘導(dǎo)最難，萌芽率只有13.3％。P19柄下芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.05 mg/L。
　　 2.在培養(yǎng)基MS+6-BA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L上，PH2的增殖系數(shù)最高3.9，P19其次為2.5，PE僅為1.6。對(duì)P

4、H2來(lái)說(shuō)，基本培養(yǎng)基MS和WPM對(duì)試管苗增殖的影響不大，1/2MS不適合增殖。以MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，PH2增殖的最佳激素組合是6-BA0.6mg/L，P19增殖的最佳組合是6-BA0.6 mg/L+NAA0.05 mg/L。
　　 3.在相同培養(yǎng)基MS+IBA0.1 mg/L上，PH2不定根數(shù)最多，多達(dá)7.0根，主根較粗、側(cè)根發(fā)達(dá)；PE不定根數(shù)量較少、較短，每株平均4.2根；P19平均根數(shù)為6.4。對(duì)PH2來(lái)說(shuō)，MS、WPM、1

5、/4MS不適合生根，1/2MS是最佳的基本生根培養(yǎng)基；以1/2MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，0.1mg/LIBA的生根效果最好。
　　 4.在培養(yǎng)基MS+BA6.0 mg/L+IBA0.5 mg/L上，PH2葉片再生率為44％，P19僅為12％。PH2葉片再生的最佳激素組合為MS+BA4.0 mg/L+IBA1.0mg/L，P19葉片再生的最佳激素組合是MS+BA6.0 mg/L+IBA0.5mg/L。先經(jīng)過(guò)7d的暗培養(yǎng)再轉(zhuǎn)入光照下培養(yǎng)，

6、對(duì)PH2葉片不定芽的分化有促進(jìn)作用。
　　 5.在PtLFY的轉(zhuǎn)化中，優(yōu)化了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的以懸鈴木葉片為受體的轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EHA105是較適合懸鈴木葉片轉(zhuǎn)化的菌株；生根培養(yǎng)40d-50d的植株葉片最適合浸染；用0.4mol/L，的甘露醇溶液預(yù)處理葉片5h對(duì)葉片傷害小且能促進(jìn)轉(zhuǎn)化；延遲選擇是懸鈴木葉片轉(zhuǎn)化中較合適的選擇方式。通過(guò)優(yōu)化后的遺傳轉(zhuǎn)化體系，共得到抗性芽5個(gè)，在增殖培養(yǎng)中玻璃化死亡。
　　 6.實(shí)驗(yàn)室保存的