草莓離體再生及抗病基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文草莓離體再生及抗病基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究姓名：王海波申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：孟祥棟2002.6.1王海波：草莓離體再生及抗病基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究摘要本研究以草莓品種豐香、矮豐、萊斯特和北斗為試材，研究了品種、激素配比、培養(yǎng)基、外植體、苗齡和培養(yǎng)條件對草莓不定芽再生的影響，優(yōu)化了革莓再生條件，獲得了草莓高效再生體系。通過葉盤與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的方法建立了矮豐草莓的遺傳轉(zhuǎn)化體系，將抗真菌Y一硫堇蛋白(Y—thi

2、onin)RsAFPl基因?qū)氚巛垒~片外植體，獲得了Kanamycin抗性植株。GUS化學(xué)組織染色和PCR檢測分析表明外源基因已整合到草莓基因組中。，f再生實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，矮豐草莓的再生能力明顯高于其它3個(gè)品種。培養(yǎng)基組成和激素配比直接影響草莓再生，MS(無機(jī)成分)B5(有機(jī)成分)培養(yǎng)基與MS、N。和WPM培養(yǎng)基相比可得到較高的不定芽再生率，在MS無機(jī)成分B5有機(jī)成分TDZ20mg／LIBAO1mg／L的培養(yǎng)基上再生率達(dá)975％。蔗糖

3、、瓊脂濃度和pH值也對草莓再生有顯著影響，以蔗糖3％(W／V)，瓊脂075％(w～)，pH5，8為最佳培養(yǎng)基條件。以BA代替TDZ后，不定芽再生率沒有顯著變化，但再生不定芽長勢減弱。暗處理和苗齡都影響草莓的再生，以35～40天苗齡，暗處理7天為晟佳培養(yǎng)條件。用矮豐草莓葉片和葉柄進(jìn)行不定芽再生實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)葉片再生頻率明顯高于葉柄，葉片接觸培養(yǎng)基的方式對再生沒有顯著影響。再生芽可在MSBAO2mg／LIBA01mg／L的培養(yǎng)基上生根。在建立矮

4、豐葉片不定芽再生體系的基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法進(jìn)行矮豐遺傳轉(zhuǎn)化研究。結(jié)果表明，預(yù)培養(yǎng)降低GUS的瞬時(shí)表達(dá)量：菌液濃度在OD550。。=O3～05之間GUS瞬時(shí)表達(dá)量最大，侵染時(shí)間以30～60分鐘為宜，共培養(yǎng)3天，IBA和AS的存在可以提高GUS瞬時(shí)表達(dá)量。共培養(yǎng)中Kan濃度過高不利于不定芽的分化，20mg／L的Kan可有效地抑制非轉(zhuǎn)化芽的再生。Carb對不定芽再生無明顯影響，試驗(yàn)中以300mg／L的Carb作為農(nóng)桿菌生長的抑制