辣椒離體再生體系的建立及抗病轉(zhuǎn)錄因子Pti4基因遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、辣椒(Capsicumu ruuuun L.)是一種重要的蔬菜作物，并因其具有特殊風(fēng)味而廣受青睞，目前在世界上許多國(guó)家和地區(qū)被廣泛栽培。但由于各種病害的危害，辣椒的產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重的影響。因此提高其抗病性一直是十分重要的研究課題。常規(guī)育種方法常常受到種質(zhì)資源匱乏和育種周期長(zhǎng)的限制，而植物基因工程技術(shù)可在一定程度上輔助克服這些問(wèn)題。在系統(tǒng)獲得抗性中，許多PR（病程相關(guān)）基因協(xié)同表達(dá)，可以有效地提高植物的廣譜抗病性。因此導(dǎo)入控制抗病基因表

2、達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子基因，從而使PR基因協(xié)同表達(dá)成為應(yīng)用基因工程技術(shù)提高植物抗病性的一種更加有效的方法。番茄抗病轉(zhuǎn)錄因子Pti4基因蛋白質(zhì)產(chǎn)物超表達(dá)時(shí)，啟動(dòng)子區(qū)域含有GCC-box或類似GCC-box序列的PR基因會(huì)顯著表達(dá)。即通過(guò)轉(zhuǎn)入外源Pti4基因激活大量的PR基因的表達(dá)，使轉(zhuǎn)基因植物的綜合抗病能力提高。
　　 本試驗(yàn)旨在通過(guò)建立的辣椒離體再生體系，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將番茄抗病轉(zhuǎn)錄因子Pti4基因?qū)氲嚼苯分?，并?duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR

3、檢測(cè)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.辣椒離體再生體系的建立
　　 1)通過(guò)‘二金條’和‘川農(nóng)泡椒1號(hào)’不定芽誘導(dǎo)能力的比較，發(fā)現(xiàn)基因型對(duì)不定芽的誘導(dǎo)有較大的影響；
　　 2)不定芽分化率以及每外植體平均分化芽數(shù)隨著苗齡的增加先升高后降低，12～16d是辣椒外植體離體再生的最佳苗齡；
　　 3)Flamingo-bill外植體優(yōu)于帶柄子葉，帶柄子葉優(yōu)于子葉；
　　 4)‘二金條’的最優(yōu)分化培養(yǎng)基是M

4、S+0.2mg/LIAA+5.0mg/L6-BA+10.0mg/LAgNO3+6.5g/L瓊脂+30.0g/L蔗糖；‘川農(nóng)泡椒1號(hào)’的最優(yōu)分化培養(yǎng)基是MS+0.5mg/LIAA+5.0mg/L6-BA+6.0mg/LAgNO3+6.5g/L瓊脂+30.0g/L蔗糖；
　　 5)2.0mg/LGA3為不定芽伸長(zhǎng)的最適濃度；
　　 6)最優(yōu)生根培養(yǎng)基配方是MS+0.2mg/LIAA+0.1mg/LNAA+6.5g/L瓊脂+3