苦瓜離體再生體系的建立及開花相關(guān)基因的研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文苦瓜離體再生體系的建立及開花相關(guān)基因的研究姓名：楊滿業(yè)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：陳放20030401四川大學(xué)博士學(xué)位論文2苦瓜外植體所形成的愈傷組織從形態(tài)學(xué)上可分為三種不同的類型：綠色愈傷組織；黃綠色愈傷組織和黃色的愈傷組織。在愈傷組織分化形成不定芽的過程中，植物激素的種類，用量及所用愈傷組織的類型非常重要。綠色愈傷組織和黃綠色愈傷組織在培養(yǎng)基(MS6BAKT)上成功地誘導(dǎo)分化出不定芽，最高分化頻率是6

2、67％；黃色愈傷組織目p使在適宜條件下也不能分化出不定芽。3篩選出培養(yǎng)基(MSzT50mgl一KT05mgl。1)較為適合芽的增殖。增殖系數(shù)為56，且幼芽的基部產(chǎn)生較少的愈傷組織。4，培養(yǎng)基1／2MSZT002mgll或1／2MS有助于幼芽離體生根，這兩種培養(yǎng)基既有利于幼芽長出新根，又不至于在幼芽基部產(chǎn)生太多的愈傷組織，影響試管苗的移栽成活率，是苦瓜幼芽離體生根較為適合的培養(yǎng)基。5試管苗經(jīng)大田移栽試驗(yàn)，成活率約為70O％，其性狀與種子苗

3、無明顯差異。6采用RTPCR和5’末端快速擴(kuò)增法成功地克隆了苦瓜開花相關(guān)基因尉￡cDNA全長1001個(gè)堿基，包含一個(gè)完整的，編碼228個(gè)氨基酸的開放讀碼框(OpenReadingFrame)。5’末端非翻譯區(qū)由50個(gè)堿基組成。3’末端非翻譯區(qū)含267個(gè)堿基，其中包括由22個(gè)堿基組成的ploy(A)尾巴及位于833bp處的ploy(A)加尾信號(hào)(AATAAA)。GenBank登錄號(hào)為：AYl78837。BAG基因是啪Sbox基因，含有完整

4、的MADS—box(氨基酸序號(hào)158)和K—box(氨基酸序號(hào)88—193)，與多種植物的MADSbox蛋白具有很高的同源性。與黃瓜(Cucumissativus)MADS咱oxproteinCUMl0的同源性為95％，與棉花(GossipierMrsutum)MADSboxprotein甾劂DE2的同源性為84％，與擬南芥(Arabidopsisthaliana)MADSboxproteinAGLll的同源性為72％：同典型的凇DS—

5、box基因AP3、AGR80、彪剛、MCMl、SRF的MADSbox區(qū)域分別有46、38、44、45、34個(gè)氨基酸殘基相同。同源性分別為80％、66％、78％、78％、59％。Southern雜交分析標(biāo)明，BAG基因在苦瓜基因組中有2或3個(gè)拷貝，屬于低拷貝數(shù)的基因。Northern雜交和RT—PcR檢測證實(shí)，BAG基因在苦瓜花的雄蕊、心皮中大量表達(dá)，雜交信號(hào)強(qiáng)烈，在其它的組織、器官中沒有明顯的雜交信號(hào)。其中心皮的表達(dá)量最為豐富。這種表達(dá)