梁山慈竹離體培養(yǎng)體系及慈竹4CL基因遺傳轉化研究.pdf

1、梁山慈竹是生產竹漿的優(yōu)良纖維原料，但在竹漿生產過程中為了脫去竹木質素需加入大量的強酸強堿等化工原料，造成成本增加和環(huán)境污染。通過生物技術手段培育木質素含量低的竹種，具有巨大的經濟效益和環(huán)境效益。竹類遺傳轉化的關鍵在于再生體系建立，而梁山慈竹等大型叢生竹的組織培養(yǎng)和植株再生一直是一大難點。本研究以梁山慈竹種胚和無菌苗不同部位為外植體，對梁山慈竹組織培養(yǎng)和再生體系進行了研究，并對愈傷組織類型及器官發(fā)生方式進行了分析；同時構建了慈竹木質素合成

2、關鍵酶基因4CL的RNA干涉載體，并通過農桿菌介導法轉化模式植物煙草和梁山慈竹愈傷組織。
　　 組織培養(yǎng)結果表明，MS誘導效果優(yōu)于WPM，MS2培養(yǎng)基更有利于愈傷組織的發(fā)生。種胚接種3天后開始膨大，進入愈傷組織誘導啟動期；15天左右進入分裂期；30天后進入分化期，形成疏松易碎、增殖能力強的顆粒狀愈傷組織，發(fā)生率高達96％。梁山慈竹愈傷組織有多種器官發(fā)生形式，不同發(fā)生形式的再生小植株的分株性能存在較大差異。在MS2上，以梁山慈竹無

3、菌苗不同部位為外植體也能誘導出愈傷組織，并形成再生植株，嫩芽和幼嫩帶節(jié)莖段誘導效果較好。
　　 對獲得的PCR陽性轉基因煙草再生植株進行了煙草內源4CL1基因的半定量RT-PCR、組織化學染色、木質素含量和4CL酶活性分析。結果表明，多數轉基因植株的內源4CL1基因表達量降低，轉基因煙草植株的Wiesner染色比對照植株淺，木質素含量和4CL酶活性均有不同程度降低。莖部和葉部木質素含量的降低范圍分別為7.6％～28.3％、2.9