蒲公英花中黃酮類化合物的分離提取及其生物效應(yīng)研究.pdf

1、本文旨在確定蒲公英花中總黃酮的最佳提取和純化工藝，分離得到蒲公英花中的黃酮類化學(xué)成分，并對(duì)其中一些成分進(jìn)行含量測(cè)定；初步探討蒲公英花提取物的抗氧化、抗腫瘤以及抑菌活性。主要內(nèi)容如下：
　　 1.采用超聲波提取技術(shù)，考察乙醇濃度、料液比、超聲功率、溫度等因素對(duì)蒲公英花中總黃酮及總酚酸提取率的影響。結(jié)果表明，用75％乙醇，料液比1∶100，超聲功率100W，在55℃的條件下超聲提取30min所得總黃酮與總酚酸的含量最高。該工藝操作簡(jiǎn)

2、便，提取效率高，重現(xiàn)性好，并在供試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)量效關(guān)系。
　　 2.采用鄰苯三酚自氧化法和鄰二氮菲-二價(jià)鐵氧化法分別測(cè)定蒲公英花提取液對(duì)超氧陰離子自由基和羥自由基的半數(shù)抑制率IC50為96.1μg·mL-1和7.7μg·mL-1；蒲公英花提取液可使花生油的過(guò)氧化值(POV)顯著降低，其效果與0.10％的維生素C相當(dāng)。提取液對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基和油脂自氧化均有較好的清除效果。
　　 3.采用單因素法考察大孔吸

3、附樹脂純化提取物的最佳工藝，對(duì)上樣溶液濃度、pH、洗脫劑濃度和流速等進(jìn)行考察，并將其與有機(jī)溶劑萃取法進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明，樹脂法純化蒲公英花中總黃酮的最佳純化工藝參數(shù)為：在D-101型大孔吸附樹脂柱中，上樣溶液濃度為1.238mg·mL-1(pH=3.0)，室溫下以流速2.0BV·h-1吸附飽和，依次用4BV水、20％、50％、70％乙醇溶液以2BV·h-1的流速洗脫，收集50％、70％乙醇洗脫液，測(cè)得黃酮純度為92.56％，吸附率為80

4、.65％，解吸率為53.44％，回收率為42.75％。有機(jī)溶劑萃取法結(jié)果表明石油醚相中黃酮純度為41.9％，回收率為34.9％；乙酸乙酯相中黃酮純度為92.4％，回收率為40.5％。
　　 4.采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)不同濃度蒲公英提取物對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2增殖的抑制作用，結(jié)果表明，隨著蒲公英提取物作用濃度的增加(0.3～1.5mg·mL-1)、作用時(shí)間(24、48和72h)的延長(zhǎng)，其HepG2對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用逐

5、漸增強(qiáng)。三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)的最大抑制率分別達(dá)71.9％、81.3％及89.5％，其IC50分別為0.860、0.583及0.404mg·mL-1。
　　 5.將蒲公英花的乙酸乙酯相提取液與肉湯稀釋液配成不同濃度的供試液，測(cè)定其最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。結(jié)果表明，其對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌和綠膿桿菌敏感：對(duì)大腸埃希菌低度敏感。
　　 6.采用聚酰胺和硅膠層析柱對(duì)總黃酮類化合物進(jìn)行分離得到單

6、體，經(jīng)核磁氫譜、碳譜和質(zhì)譜解析確定結(jié)構(gòu)，并采用HPLC法測(cè)定各個(gè)提取物中木犀草素的含量。從蒲公英花中分離得到4個(gè)化合物，結(jié)構(gòu)鑒定其中2個(gè)(1-2)分別是木犀草素、金圣草素。并首次建立了蒲公英花中木犀草素含量測(cè)定的HPLC法，色譜條件為：色譜柱ZORBAXEclipseXBD-C18(5μm，250×4.6mm)，流動(dòng)相為甲醇：水：醋酸=60∶39∶1，檢測(cè)波長(zhǎng)350nm，線性范圍為1.0～5.Oμg·mL-1(r=0.9999)，回收率