貫葉連翹中黃酮類化合物的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、貫葉連翹在我國分布廣泛,資源豐富,人工栽培面積不斷擴(kuò)大,自2005年被中國藥典收錄以后,學(xué)術(shù)界對(duì)其的研究也相對(duì)增多,傳統(tǒng)中醫(yī)研究表明,貫葉連翹有清熱解毒、調(diào)經(jīng)活血的功效,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,它具有抗抑郁、抗病毒等作用,其中的黃酮類化合物具有抗衰老、抗糖尿病及抗氧化等多種生物活性。
　　 本實(shí)驗(yàn)以貫葉連翹為原材料,探索了其中黃酮類化合物的提取和初步分離工藝,并分離出黃酮類化合物的單體,最后對(duì)單體進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。本實(shí)驗(yàn)課題為進(jìn)一步高

2、效合理地開發(fā)利用貫葉連翹藥材提供了科學(xué)的理論依據(jù),增大了藥材的利用價(jià)值。
　　 本試驗(yàn)建立了貫葉連翹中黃酮類化合物含量測定的紫外-可見分光光度法,樣品的80%乙醇溶液在紫外光區(qū)的最大吸收波長為360nm,添加顯色劑后在可見光區(qū)的最大吸收波長為510nm,在0.015-0.075mg/mL濃度范圍內(nèi),A510與蘆丁含量間有良好的線性關(guān)系。貫葉連翹黃酮類化合物的提取采用超聲波輔助有機(jī)試劑提取法,以蘆丁的含量為指標(biāo),考察提取試劑的種類

3、、濃度、超聲處理的時(shí)間、溫度、頻率、次數(shù),以及料液比等因素對(duì)黃酮類化合物得率的影響,從中選擇影響較大的四個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),得到最佳的提取工藝:稱取一定量的貫葉連翹干燥藥材粉末,按照料液比1:30,以體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇作為提取溶劑,提取兩次,每次45min,所得黃酮類化合物的含量最大,為7.003%。
　　 對(duì)貫葉連翹黃酮類化合物的乙醇粗提液進(jìn)行初步分離純化,選擇三種較宜分離黃酮類化合物的大孔吸附樹脂,即D101、D4020

4、、AB-8。通過靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)和靜態(tài)解吸實(shí)驗(yàn),比較三種大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附量和解吸率,結(jié)果顯示,D101型大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附量最大,為78.767mg/g,以40%的乙醇解吸時(shí)解吸率最大,為90.2%,因此三種樹脂中,D101大孔吸附樹脂對(duì)貫葉連翹中黃酮類化合物的分離效果最好,并通過動(dòng)態(tài)吸附及洗脫實(shí)驗(yàn)考察樣品液濃度、上樣量、洗脫劑體積分?jǐn)?shù)以及洗脫劑用量等條件對(duì)分離效果的影響,從而確定了初步分離最佳的洗脫工藝,結(jié)果表明:選用D101大

5、孔吸附樹脂,樣品液濃度為3.202mg/mL,上樣量約為8倍的樹脂體積,最佳洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)40%的乙醇,用量為3BV。
　　 同時(shí)采用有機(jī)溶劑萃取法對(duì)貫葉連翹黃酮類化合物的粗提液初步分離,依次采用石油醚(沸程60℃-90℃)、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取。
　　 將分別經(jīng)過大孔吸附樹脂和有機(jī)溶劑萃取初步分離的樣品,經(jīng)硅膠柱層析法進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化,以石油醚-乙酸乙酯和乙酸乙酯-甲醇作為洗脫劑,梯度洗脫,收集的洗脫液濃縮后