大葉藻中黃酮類化合物的研究.pdf

1、研究報道,黃酮類化合物具有廣泛的生物活性,包括抗氧化、抗突變、抗衰老、抗腫瘤、抗菌等,是茶及眾多中草藥如黃芩、銀杏、沙棘等的活性成分。黃酮可以改善血液循環(huán),降低膽固醇,改善心腦血管疾病的癥狀。本文主要介紹從大葉藻中提取分離純化黃酮類化合物,并研究黃酮粗提物的抗氧化活性。
　　 本文首先綜述了大葉藻的生物門類、生活習(xí)性,黃酮類化合物的分類、生物活性、各種理化性質(zhì)和顯色反應(yīng)等,并對國內(nèi)外文獻中黃酮類化合物的提取、純化、分離和分析過程

2、的研究進展進行了概述和比較。
　　 試驗中,首先測定了大葉藻中各種基本成分的含量,總糖含量:7.1％,粗脂肪含量:1.2％,蛋白質(zhì)含量:5.21％,在已測定的16中氨基酸中,每100g大葉藻中氨基酸含量可達21.134g,其中必須氨基酸有6種,共7.470g,占氨基酸總量的35.346％,非必須氨基酸總量為13.664g,占必須氨基酸總含量的64.654％。在必須氨基酸中,以纈氨酸含量最高,占必須氨基酸含量的23.655％,蛋氨

3、酸含量最低,占必須氨基酸含量的7.416％。在非必須氨基酸中,谷氨酸含量最高,占非必須氨基酸含量的23.259％,以組氨酸含量最低,占非必須氨基酸含量的2.518％。
　　 其次進行了黃酮類化合物的浸提試驗,試驗中總黃酮含量分析采用酸性條件下氯化鋁顯色的可見分光光度法。乙醇作為浸提液,研究了傳統(tǒng)工藝浸提法、超聲波輔助浸提法、纖維素酶輔助浸提法和纖維素酶-超聲波輔助浸提法,得到了這四種提取方法對黃酮的最佳浸提條件,并對其最大提取率

4、進行比較,傳統(tǒng)工藝提取法最佳提取工藝:提取溫度55℃,提取時間3h,乙醇濃度為85％,提取料液比為1:30,最大提取率為1.84％;超聲波輔助浸提法最佳提取工藝條件:超聲時間15min,超聲功率300W,乙醇濃度20％,料液比1:10,最大提取率為3.80％;酶解輔助浸提法最佳提取條件:加酶量為0.030g/g原料、酶解時間為25℃、酶解pH為4、酶解時間1h,最大提取率為5.93％;纖維素酶-超聲波輔助浸提法最佳提取條件:超聲時間15

5、min,超聲功率250W,纖維素酶量0.025g/g原料,酶解PH5,最大提取率為7.86％。結(jié)果表明,纖維素酶-超聲波輔助浸提法的提取率最高。
　　 浸提得到的粗黃酮提取物,進行硅膠層析柱的初步分離純化。首先是使用極性由小到大的各種有機溶劑連續(xù)抽提(石油醚-乙酸乙酯-正丁醇-水),從而將親脂性的成分和親水性的成分分開。然后詳細的對液液萃取純化后的成分用硅膠板進行了展開劑的選擇,發(fā)現(xiàn)氯仿:甲醇系統(tǒng)對該混合物具有較好的展開性能,再

6、用硅膠柱層析對液液萃取純化后的粗提物進行了分離純化,最后采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對純化物的結(jié)構(gòu)進行檢測分析。分析得到了七種黃酮化合物:(1)3,4,5,4'-四甲氧基查耳酮;(2)3,4-二甲氧基-8,9-二氧亞甲基紫檀素;(3)5-羥基-7,4'-二甲氧基黃酮;(4)5,7,5'-三羥基-4'-甲氧基二氫黃酮;(5)5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇;(6)4',5'-二羥基-7-甲氧基黃酮醇;(7)5,7,4'-三羥基黃酮。

7、　　 在所發(fā)現(xiàn)的七種黃酮類物質(zhì)中,5,7,4'-三羥基黃酮具有與毛地黃黃酮相似的結(jié)構(gòu),所不同之處是由于5,7,4'-三羥基黃酮在3'位置是一個氫而不是一個羥基。根據(jù)相似結(jié)構(gòu)具有相似特性,可推測5,7,4'-三羥基黃酮也應(yīng)該與有與毛地黃黃酮相似的特性,需要做進一方面的驗證和檢測。5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇具有與金雀花異黃素相似的結(jié)構(gòu)特征,而金雀花異黃素具有雌性激素的作用,因此可推測5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇具有雌激素的作

8、用,需進一步的驗證和分析。其中的3,4,5,4'-四甲氧基查耳酮,3,4-二甲氧基-8,9-二氧亞甲基紫檀素和5-羥基-7,4'-二甲氧基黃酮這三種物質(zhì)含甲氧基較多,據(jù)研究發(fā)現(xiàn)多聚甲氧基的脂溶性黃酮具有較強的抗腫瘤特性,這是由于聚甲氧基的黃酮類呈脂溶性,更易于接近并浸透到腫瘤細胞而起到作用。因此這三種黃酮對于開發(fā)新的抗腫瘤藥物具有一定的實際利用價值。而其中5,7,5'-三羥基-4'-甲氧基二氫黃酮、5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇、5

9、,7,4'-三羥基黃酮屬于多羥基黃酮醇,而多羥基黃酮醇類化合物經(jīng)生物學(xué)試驗,證實可用于升高血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),降低血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和血漿甘油三脂(TG)。這些黃酮類物質(zhì)對于預(yù)防和治療諸如外周血管疾病、冠心病、中風(fēng)疾病、血管再狹窄等血管疾病具有一定的功效。
　　 本文采用大葉藻為提取原料一方面有效利用了大葉藻,另一方面為抗腫瘤抗癌及心腦血管疾病藥物的開發(fā)開辟了新的空間。也為大葉藻中黃酮結(jié)構(gòu)-功

10、能方面的研究提供了依據(jù)。
　　 文章最后進行了大葉藻黃酮化合物粗提物的抗氧化活性實驗,主要是研究其對超氧陰離子的清除能力、對羥自由基的清除能力,以及對油脂的抗氧化酸敗等,大葉藻黃酮對羥自由基、超氧陰離子有較強的清除作用。當(dāng)添加濃度為10mg·mL-1時,對羥自由基的清除作用最大可達91.56％;當(dāng)添加濃度為8mg·mL-1時,對超氧陰離子的清除作用最大可達90.43％,說明適宜的添加濃度,大葉藻黃酮可以完全清除了已產(chǎn)生的超氧陰離